摘要:

目的 分离、培养及鉴定SD大鼠来源脂肪干细胞,为后续实验选取合适的种子细胞奠定基础.方法 切取SD大鼠腹股沟处皮下脂肪,利用酶原消化合并差速贴壁的方法获得细胞,在倒置相差显微镜下观察细胞形态和增殖特征,测定其生长曲线,进行冻存复苏实验.第3代细胞在成骨诱导液作用下向成骨方向分化,进行Ⅰ型胶原染色、碱性磷酸酶染色、茜素红染色；使用成脂诱导液诱导其向成脂方向分化,进行油红O)染色.结果 从大鼠脂肪组织获得的细胞,呈成纤维细胞样生长；经成骨诱导液培养后,表现出成骨细胞特性,Ⅰ型胶原染色、碱性磷酸酶染色、茜素红染色均呈阳性；经成脂诱导液培养后,表现出脂肪细胞特性,油红O染色后,胞浆内可见脂肪滴.脂肪干细胞在液氮中冻存2个月复苏后,其生长增殖活性和多向分化能力没有明显降低.结论 成功分离和培养大鼠脂肪干细胞,获得的细胞增殖旺盛,具有多向分化潜能,为后期运用组织工程技术修复组织损伤,提供了坚实的基础.

摘要:

目的 探讨成骨诱导后的人脐血间充质于细胞(UCB-MSCs)与β-磷酸三钙(TCP)构成的人工植骨材料修复兔颅骨缺损的作用.方法 在无菌条件下用密度梯度离心和贴壁培养法分离培养人UCB-MSCs;取传3代细胞应用条件培养基进行成骨诱导2周后,绘制细胞生长曲线并检测碱性磷酸酶(AKP)、骨钙素(OCN)和钙离子的含量;成骨诱导后UCB-MSCs与β-TCP复合培养后形成人工植骨材料,用扫描电镜观察成骨诱导后的UCB-MSCs在β-TCP表面的生长状况;按人工植骨材料的形状制作兔颅骨全层缺损模型,术后4周行颅骨X线摄片,分析人工材料对骨缺损的修复作用.结果 采用Percoll(1.073 g/mL)密度梯度离心和贴壁培养得到的UCB-MSCs大小较为均匀、梭形或星形的成纤维细胞样细胞.成骨诱导前后细胞的生长曲线测定无明显变化;UCB-MSCs内AKP、培养基中的OCN含量和细胞内钙离子的含量与对照组相比均明显增高(P＜0.01);成骨诱导的细胞在β-TCP表面生长良好,在细胞周围有白色的钙盐沉积.人工植骨材料植入骨缺损4周后,发现复合材料与颅骨缺损中间大部分被高密度影所充填.结论 成骨诱导后的UCB-MSCs呈现成骨细胞特性,在β-TCP表面生长状态良好;与β-TCP构成人工植骨材料具有促进骨缺损修复的作用.

摘要:

目的:对比SD 大鼠和Wistar 大鼠皮下脂肪源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)体外诱导分化能力,为ADSCs 的进一步应用提供实验依据.方法:SD 大鼠和Wistar 大鼠各6 只取腹股沟脂肪垫,培养扩增ADSCs,相差显微镜下观察两个品系来源的ADSCs 的形态.用第4 代细胞进行成骨和成脂诱导,分别用茜素红和油红O 染色观察向成骨细胞分化后的矿化结节和向脂肪细胞分化后的脂质沉积.结果:两个品系来源的ADSCs 在细胞形态上没有显著区别,都能进行成骨和成脂诱导分化.结论:SD 大鼠和Wistar 大鼠腹股沟脂肪垫来源的ADSCs 诱导分化能力差异无显著性.

摘要:

背景：当前国内外关于矿化明胶电纺丝纤维对牙周组织成骨诱导有效性的文献较少。目的：观察矿化明胶静电纺丝对牙周膜成纤维细胞增殖及向成骨方面分化的影响。方法：将人牙周膜成纤维细胞分别与未矿化明胶静电纺丝、纳米羟基磷灰石矿化1 d的明胶静电纺丝、纳米羟基磷灰石矿化5 d的明胶静电纺丝复合培养，采用MTT法检测培养1，4，7，10，13 d的细胞增殖；应用生化仪检测培养1，7，14 d的细胞碱性磷酸酶活性。结果与结论：培养10 d时，矿化明胶静电纺丝膜组表面的牙周膜细胞分布均匀，生长良好，铺展成片状并分泌大量细胞外基质，细胞与材料结合紧密，且以矿化5 d组效果更明显，细胞生长密度和状态优于未矿化明胶静电纺丝膜组。不同时间点的细胞增殖活性与碱性磷酸酶活性：矿化5 d明胶静电纺丝膜组>矿化1 d明胶静电纺丝膜组>未矿化明胶静电纺丝膜组(P均<0.05)。表明经纳米羟基磷灰石矿化的明胶静电纺丝，可促进牙周膜成纤维细胞增殖及向成骨方向分化，且矿化时间越长效果越明显。

摘要:

背景：研究发现充足的血供是骨组织修复与再生必不可少的条件。
　　目的：应用血管内皮祖细胞与骨髓间充质干细胞构建出复合细胞膜片。
　　方法：体外分离培养SD大鼠血管内皮祖细胞及骨髓间充质干细胞，将两种细胞直接共培养，经成膜诱导10 d后构建出复合细胞膜片并对获得的膜片进行大体、倒置显微镜及苏木精-伊红染色观察。将血管内皮祖细胞及骨髓间充质干细胞分别应用荧光标记液标记后，观察膜片诱导过程中两种细胞的分布及交流情况。对复合细胞膜片进行碱性磷酸酶活性检测及茜素红染色，观察其成骨分化能力。
　　结果与结论：血管内皮祖细胞与骨髓间充质干细胞直接共培养成膜诱导10 d后可成功获得复合细胞膜片，两种细胞在成膜诱导过程中存在细胞间接触。获得的膜片由多层细胞及细胞外基质构成，经碱性磷酸酶活性检测及茜素红染色结果证实该膜片具有较强的成骨分化能力，为进一步将血管内皮祖细胞/骨髓间充质干细胞复合细胞膜片应用于骨缺损的修复提供了条件。

摘要:

背景:近年来,骨组织工程技术为临床治疗骨缺损提供了全新的思路和模式.该研究首次将传统中药与组织工程支架的纳米结构结合,以期探索并构建一种可用于骨缺损治疗的新型骨组织替代材料.目的:研究淫羊藿苷(icariin,ICA)/羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)/聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)复合支架的成骨活性.方法:将HA与PLGA通过物理共混的方式制成HA/PLGA复合支架,然后将其浸泡于不同浓度的ICA溶液中,从而得到ICA/HA/PLGA支架.利用兔骨髓间充质干细胞分别对复合支架的细胞黏附、增殖、成骨作用和细胞毒性进行评价.细胞黏附、细胞增殖和细胞毒性采用MTT法进行检测,碱性磷酸酶活性和骨钙素活性采用ELISA法进行检测,成骨相关基因和蛋白表达水平分别用荧光定量PCR和Western blot法进行检测.结果与结论:①PLGA中加入适量HA可以提高支架的力学强度,且在HA含量为10％时效果最佳,拉伸强度为(1.67±0.37)MPa;压缩模量为(4.17±1.62)MPa,且会在支架表面形成纳米结构;该微结构可以促进骨髓间充质干细胞在支架表面的黏附;②ICA不会影响骨髓间充质干细胞在复合支架上的增殖,且1.00μmol/L ICA水溶液浸泡后的ICA/HA/PLGA复合支架具有最优的成骨分化功能,其碱性磷酸酶活性、骨钙素活性、成骨相关基因和蛋白(Runx-2和COLⅠ)的表达水平均最高;③ICA/HA/PLGA复合支架无细胞毒性;④结果表明,HA(10％)/ICA(1.00μmol/L)/PLGA支架具有良好的机械性能、成骨作用和生物相容性,是一种具有良好应用潜力的骨组织工程支架.

摘要:

背景:研究发现降钙素基因相关肽能够增强成骨细胞的生物学活性,实验拟进一步检测降钙素基因相关肽对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响.目的:探讨外源性降钙素基因相关肽对去势大鼠骨髓间充质干细胞增殖、成骨能力的影响.方法:切除雌性SD大鼠双侧卵巢建立骨质疏松模型,并通过micro-CT验证.从假手术和去势大鼠股骨中提取骨髓间充质干细胞,培养液中添加不同浓度降钙素基因相关肽,MTT法检测细胞增殖能力.对骨髓间充质干细胞进行成骨诱导,在诱导液中添加不同浓度降钙素基因相关肽,成骨诱导7 d,采用Real time RT-PCR和Western blot检测成骨特异性蛋白Runx2,Osterix的表达,成骨诱导21 d进行茜素红染色.结果与结论:①切除雌性大鼠双侧卵巢可成功建立骨质疏松模型;②不同浓度的降钙素基因相关肽可增强去势大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及成骨分化能力,且具有剂量依赖性;③结果表明,降钙素基因相关肽对去势大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力有直接促进作用,从而有利于骨形成.

摘要:

背景：细胞学研究表明，骨髓间充质干细胞在绝经后骨质疏松症的发病过程中起有重要作用。
　　目的：观察去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞的体外成骨分化。
　　方法：将6月龄雌性SD大鼠双侧卵巢切除建立骨质疏松模型。实验分为4组：正常干细胞组、骨质疏松干细胞组、正常干细胞成骨诱导组、骨质疏松干细胞成骨诱导组。全骨髓贴壁法培养正常和骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞至第3代细胞用于实验。倒置相差显微镜观察细胞形态，流式细胞仪测定细胞周期、增殖指数。加成骨诱导液进行成骨诱导，检测各组骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性，茜素红染色法比较各组钙结节的形成。
　　结果与结论：正常干细胞成骨诱导组、骨质疏松干细胞成骨诱导组均具有成骨细胞的形态特征，但骨质疏松干细胞成骨诱导组形态变化相对缓慢。正常干细胞组细胞增殖指数高于骨质疏松干细胞组(P<0.05)；成骨诱导组碱性磷酸酶活性均明显高于相应的正常或骨质疏松干细胞组(P<0.05)；正常干细胞成骨诱导组明显高于骨质疏松干细胞成骨诱导组(P<0.05)。成骨诱导组茜素红染色均呈阳性，相应的正常或骨质疏松干细胞组呈阴性；且正常干细胞成骨诱导组染色强于骨质疏松干细胞成骨诱导组。提示去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞的增殖能力和成骨分化能力明显降低，可能与去卵巢大鼠骨质疏松的发生相关。

摘要:

背景：骨髓来源的间充质干细胞含量极低，体外纯化、扩增活性好、分化潜能高的骨髓间充质干细胞，对进一步研究至关重要。
　　目的：进一步验证全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化骨髓间充质干细胞的生物学特性、表型及多向分化潜能。
　　方法：通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞，进行形态学观察，流式细胞仪检测细胞标记物表达，分别进行成骨、成脂诱导分化。
　　结果与结论：成功纯化、扩增了高细胞活性、高分化潜能的骨髓间充质干细胞。所得细胞呈成纤维细胞样；表达CD29、CD90，不表达CD45；成骨、成脂诱导分化后，茜素红染色、油红O染色阳性。证实全骨髓贴壁法操作简单、对细胞活性损伤小，可以得到高纯度、高活性、高分化潜能、生物学形态和特征稳定的骨髓间充质干细胞。

摘要:

背景:目前异种松质骨作为组织工程材料较为多见,而皮质骨因其难以降解,孔隙率低等原因限制了其使用.但皮质骨具有许多松质骨不具备的优越性,如生物力学方面,如何开发利用皮质骨是课题研究的重点.目的:观察兔骨髓间充质干细胞复合带部分松质骨小牛皮质骨支架材料植入兔体内后血管内皮细胞生长因子表达.方法:健康1月龄新西兰大白兔4只用于干细胞提取;3月龄新西兰大白兔60只,在髂骨翼分别植入骨髓间充质干细胞成骨诱导后复合异种骨,单纯异种骨,自体髂骨.术后4,8,12,24周取材RT-PCR检测血管内皮细胞生长因子的表达.结果与结论:血管内皮细胞生长因子的表达情况:在各时间点,单纯异种骨组低于骨髓间充质干细胞成骨诱导后复合异种骨组和自体髂骨组(P < 0.05).术后第4周时,骨髓间充质干细胞成骨诱导后复合异种骨组低于自体髂骨组(P < 0.05),在术后第8,12,24周时,两组差异无显著性意义(P > 0.05).提示兔骨髓间充质干细胞复合带部分松质骨的小牛皮质骨支架材料植入新西兰兔体内具有较好的血管生成能力.