摘要:

研究针对美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守的N蛋白基因设计了4条LAMP的检测引物,通过优化反应条件,建立了一种检测PRRSV的LAMP诊断方法.特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异地检测美洲型PRRSV,其最低检测限为1×101个拷贝,而常规PCR的最低检出限为1×105个拷贝.判定检测结果时不需要借助昂贵仪器设备,仅需加入1μL橙红色核酸染料就可以进行判断,颜色变绿判定为阳性,仍保持为橙红色判定为阴性.LAMP可以快速、直观、准确地检测PRRSV,是一种适合猪场现地应用的检测方法.

摘要:

目的:将核酸SYBR-Green染料应用于端粒酶活性检测和食物中毒致病菌的PCR-SSCP分析.方法:采用TRAP法检测A549肺腺癌细胞株、293细胞株、HL-60白血病细胞株端粒酶活性.金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、福氏志贺氏菌、腊样芽胞杆菌标准株增菌后,进行PCR-SSCP分析.在上述两种检测方法中,扩增产物电泳后均采用SYBR-Green染色.结果:TRAP-SYBR-Green染色法检测HL-60白血病细胞株端粒酶活性的灵敏度可达15个细胞左右.PCR-SSCP检测常见食物中毒致病菌的敏感性可达10～15个鼠伤寒沙门氏菌细胞.结论:SYBR-Green染色法用于端粒酶活性的检测和致病菌的PCR-SSCP分析,具有快速、简便、灵敏度高、安全的特点.

摘要:

本研究旨在建立一种基于颜色变化的北美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）RT-LAMP检测方法及结果判定方法，方便LAMP技术的现场检测应用。根据GenBank中美洲型PRRSV的保守序列设计一套LAMP引物，对反应进行优化后建立了PRRSV LAMP检测方法。对比Dye63、钙黄绿素（Calcein）、SYBR Green I和Picogreen 4种核酸染料对于LAMP反应的适用性。结果显示，只有Calcein、Dye63适于LAMP反应前加入，但对扩增效率均产生一定抑制，造成反应时间延迟：Calcein的延迟作用更强（约10min），Dye63延迟作用较小（约5min）。加入Dye63的LAMP反应灵敏度为2×101拷贝，而加入Calcein的灵敏度要低10倍。经多功能酶标仪对荧光强度的检测，含Dye63的反应阴阳性差异明显，可用于LAMP反应结果的判定。据此建立的基于新型核酸染料Dye63的PRRSV RT-LAMP检测方法操作简单、方便、直观，可大大减少环境污染造成的假阳性。Dye63有望成为继Calcein之后，可用于LAMP反应前加入，反应后闭管判定的一种新核酸染料，方便LAMP检测技术现场应用。