摘要:

目的 观察睾酮对体外培养牛眼小梁细胞(bovine trabecular meshwork cells,BTMC)中的组织型谷氨酰胺转移酶(tissue transglutaminase,tTG)在mRNA水平和蛋白水平表达的影响,初步探讨睾酮与原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma,POAG)发病的关系.方法 取新生牛BTMC原代培养和传代培养,通过细胞形态学及免疫组化染色法进行鉴定后,取3～5代BTMC用于实验.用不同浓度的睾酮作用24 h.采用RT-PCR与Western-blotting方法检测不同浓度睾酮作用前后BTMC tTG表达水平的变化.结果 分别加入浓度为18×10-3 mmol·L-1、36×10-3 mmol·L-1、54×10-3 mmol·L-1、72×10-3 mmol·L-1睾酮的培养液作用后,RT-PCR产物电泳结果显示正常对照组(不合睾酮)、睾酮组均在433 bp处出现特异性的tTG基因条带,但睾酮组表达明显高于正常对照组；各组均在212 bp处出现β-actin的扩增产物的基因条带,且表达无明显差别.激光灰度值扫描进行半定量分析后,不同浓度睾酮组的tTG相对积分光密度值分别为1.461±0.021、2.111±0.016、2.536±0.032、3.176±0.026,其中后三个浓度组与正常对照组的相对积分光密度值1.487±0.013比较,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05),但18×10-3mmol·L-1睾酮组与正常对照组间差异无统计学意义.Western blotting检测结果显示tTG的蛋白表达水平也随睾酮浓度变化而变化.结论 雄激素睾酮可显著增加BTMC中tTG的表达.tTG的增加可能与POAG的发病有关.提示雄激素可能通过tTG作用而与POAG发病有一定关系.

摘要:

目的研究人晶状体前囊膜(LC)中组织型谷氨酰胺转移酶(tTG)和纤维连接蛋白(FN)的表达及相互关系.方法在白内障摘除术中获得晶状体前囊膜,立即进行免疫组化染色,光镜下观察标本表达情况并结合图像分析测定染色强度.结果tTG各组标本中皮质性组与核性组、外伤性组之间统计学差异明显(P＜0.05);FN各组标本中,皮质性组与核性组、外伤组、正常组之间统计学差异明显(P＜0.05),其他各组间无明显统计学差异.回归分析显示人晶状体上皮中FN的表达有39.1%可由晶状体上皮细胞中tTG的不同来解释.结论tTG在皮质性白内障人晶状体上皮细胞中表达升高可某种程度促进与之关联的FN的合成.

摘要:

目的观察组织型谷氨酰胺转移酶 (tissue transglutaminase,tTG) 硫代磷酸化修饰反义寡核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotide,ASODN) 对体外培养牛眼小梁细胞 (bovine trabecular meshwork cell,BTMC) tTG在mRNA水平和蛋白水平表达的影响,初步探讨tTG-ASODN在治疗原发性开角型青光眼中的可能性.方法根据牛tTG mRNA的二级结构设计并合成ASODN1、ASODN2,用阳离子脂质体Lipofectamin包埋后转染BTMC,以半定量逆转录-聚合酶链反应法检测转染后tTG mRNA表达的变化,以免疫组织化学SP法检测转染后tTG蛋白表达的变化.结果 ASODN1组和ASOND2组的tTG/GAPDH灰度比值分别为1.069 5±0.000 9、1.066 2±0.000 7,空白对照组和错义寡核苷酸组分别为1.018 5±0.002 4、1.016 7±0.001 2;tTG-ASODN1、tTG-ASODN2对BTMC的tTG mRNA和蛋白表达均有明显的抑制作用,与空白对照组和错义寡核苷酸组相比有显著性差异( P<0.05);tTG-ASODN1与tTG-ASODN2 2组间无显著性差异( P>0.05).结论 tTG-ASODN可明显下调BTMC的tTG在mRNA和蛋白水平的表达,提示tTG-ASODN有望在原发性开角型青光眼的治疗中发挥重要作用.