摘要:

目的：研究传代对残耳软骨细胞体内软骨形成能力的影响。方法分离培养人残耳软骨细胞，将第3~8代细胞分别复合聚羟基乙酸/聚乳酸支架，构建组织工程化软骨；体外培养4周后植入裸鼠体内观察8周。采用组织学染色观察各组标本的软骨形成情况；Real-time PCR检测软骨分化相关基因的表达；生物力学分析新生软骨的弹性模量。结果各代复合物体外培养4周时均不能形成软骨组织，但第3~5代残耳软骨细胞COL 2A1、第3~4代的SOX 9和第3代的DLK 1仍可维持较高的表达水平（P<0.05）；体内植入8周后，第3~6代复合物均有不同程度的弹性软骨结构形成，并随代次增高而减少，第3~6代复合物的弹性模量明显高于第7、8代。结论残耳软骨细胞传至第4代仍能保持良好的体内软骨形成能力，但扩增传代对残耳软骨细胞软骨表型去分化的影响在第7代后已无法逆转。

摘要:

目的 通过在微载体上进行平板培养扩增软骨细胞,并结合液态壳聚糖构建组织工程软骨.方法 比较兔软骨细胞在单层培养与微载体上进行三维培养扩增软骨细胞的再分化能力.通过酶解法消化幼兔膝关节软骨后,得到种子细胞,分别进行单层和微载体三维培养扩增.通过评价细胞活性,倍增时间分析培养效果.并进行体外球型培养评价软骨细胞再分化能力,进行了糖胺多糖的定量生化分析.三维培养扩增软骨细胞与壳聚糖复合构建组织工程软骨,培养21天后通过组织学特种染色鉴定构建组织特性.结果 微载体培养的软骨细胞可以保持良好活力和再分化能力,与单层培养体系相比较,糖胺多糖的定量生化分析(30.417±1.116ugGAG/mg样本)和(45.122±1.239 ug GAG/mg样本)的筹异具有统计学意义(P<0.05).结论 在微载体上进行三维培养扩增软骨细胞可以加强细胞再分化能力.软骨细胞与壳聚糖合成后,可以在体外形成形态稳定的组织工程软骨.

摘要:

目的：研究牙髓细胞和肋软骨细胞共培养形成的组织工程软骨的胶原类型。方法：人肋软骨细胞和牙髓细胞按1∶1的比例用微团法共培养来促进其向软骨细胞分化。应用苦味酸天狼猩红染色，偏正光检测法研究形成的组织工程软骨胶原类型，并与颅颌面区域软骨进行比较。结果：肋软骨细胞和牙髓细胞微团法共培养形成的组织工程软骨中以I型胶原为主，同时包括II和III 型胶原纤维，其纤维结构组成与肋软骨、髁突软骨增殖层及颞下颌关节盘的纤维结构相似。结论：肋软骨细胞和牙髓细胞共培养可形成的组织工程软骨，其组织结构与纤维软骨相似。

摘要:

摘要:

目的 探索以负载姜黄素材料为支架,在动物皮下构建组织工程软骨的可行性.方法 通过细胞划痕试验明确既可抑制血管但又不影响干细胞生物活性的姜黄素的最佳浓度范围.负载姜黄素的支架材料与单纯明胶支架材料分别植入裸鼠皮下,术后3、6周取材,比较局部皮下血管抑制程度.软骨细胞-负载姜黄素支架复合物与软骨细胞-明胶支架复合物分别植入裸鼠皮下,术后3、6周取材进行组织学检测,比较软骨形成情况.结果 姜黄素对hUVEC的有效抑制浓度为30μmol/L,而对BMSC的有效抑制浓度为40μmol/L.负载姜黄素支架在裸鼠皮下具有明显的血管抑制作用.软骨细胞-负载姜黄素支架复合物在裸鼠皮下可形成成熟软骨.结论 负载姜黄素支架具有血管抑制作用且不影响软骨再生,有望成为软骨再生的理想支架.

摘要:

背景:构建组织工程软骨的方法多为自体种子细胞复合天然或合成物支架,目前多存在种子细胞来源有限、支架安全性和生物相容性、以及细胞在支架中分布不均的问题.目的:探讨人脐带Wharton胶中间充质干细胞向软骨诱导分化并体外构建无支架组织工程软骨的可行性.方法:分离培养人脐带Wharton胶中的间充质干细胞,进行流式细胞学鉴定.对软骨诱导前后的细胞进行组织学和免疫组织化学染色,对其表达的葡萄糖胺聚糖和Ⅱ型胶原进行定量研究,并应用RT-PCR检测软骨诱导前后Ⅱ型胶原和Sox-9mRNA的表达.采用密集诱导培养→离心管培养→生物反应器培养,进行体外构建无支架软骨组织.结果与结论:人脐带Wharton胶富含干细胞,流式细胞仪检测结果显示这些细胞不表达造血干细胞标志,表达CD44,CD105、CD271等间充质干细胞表面标志;HLA-ABC阳性表达,HLA-DPDQDR阴性表达.未进行软骨诱导的细胞弱表达软骨细胞标志,诱导后葡萄糖胺聚糖和Ⅱ型胶原显著增高.RT-PCR结果显示人脐带Wharton胶间充质干细胞诱导前后均表达Sox-9、Ⅱ型胶原mRNA.说明人脐带Wharton胶间充质干细胞具有前软骨细胞的特性.采用密集诱导培养结合生物反应器培养,不用支架,体外可以构建成大块组织工一[程软骨.表明人脐带Wharton胶间充质干细胞是一种良好的构建组织工程软骨的种子细胞.

摘要:

背景:目前治疗软骨缺损的方法均有明显缺陷,组织工程软骨修复关节软骨缺损为微创治疗软骨缺损提供了新方法.目的:总结组织工程软骨应用于修复关节软骨缺损的新进展.方法:由第一作者用计算机检索万方数据库(2000/2010)和PubMed 数据库(2000/2010),检索词分别为"软骨缺损,组织工程软骨"和"articular cartilage defects,tissue-engineered cartilage ",语言分别设定为中文和英文.从组织工程软骨及其新进展2 方面进行总结,对组织工程软骨的发展及构建等方面进行介绍.共检索到666 篇文献,按纳入和排除标准对文献进行筛选,共纳入23 篇文章.结果与结论:近年来随着细胞支架材料的不断发展和组织构建技术的日趋成熟,结合活性细胞和支架的组织工程软骨为微创修复关节软骨缺损提供了良好的治疗手段及方法,组织工程软骨修复软骨缺损是完全可行的,C-GP 凝胶与种子细胞相容性好,可做为组织工程软骨的理想支架,但细胞支架的制备及选择仍然是组织工程软骨的热点和难点.

摘要:

背景:实验表明,软骨细胞在体外培养时,经常发生表型的丢失.但形成软骨细胞团块时可以维持软骨细胞表型,由此人们探讨无支架结构培养组织工程软骨的技术.目的:拟建立软骨细胞聚集培养体系,观察在琼脂糖表面培养软骨细胞,无支架条件下构建组织工程软骨的特点.设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-10/2007-04在解放军南京军区总医院骨科研究所完成.材料:SPF级新西兰白兔4只,2周龄,雌雄不限.方法:分离、提取兔关节软骨原代软骨细胞,将低熔点琼脂糖铺于24孔培养板表面,按每孔2.5×105接种提取的兔原代软骨细胞,在培养箱内培养,定期换液.主要观察指标:取10d标本行组织学、Ⅱ型胶原免疫组织化学检测.结果:10d时,软骨细胞自聚集形成有一定形状、大小的类软骨组织,苏木精-伊红染色可见软骨陷窝结构,甲苯胺蓝染色见紫红色异染,说明有蛋白聚糖的分泌.钙染色未见钙化, Ⅱ型胶原免疫组织化学染色有棕黄色颗粒,说明有Ⅱ型胶原分泌.结论:在琼脂糖表面构建组织工程软骨的培养体系,琼脂糖膜阻止软骨细胞的黏附和伸展,从而保持软骨细胞的圆形形态;软骨细胞在琼脂糖表面直接接触,加强了细胞之间的信息交流,有利于维持细胞的表型,维持软骨细胞分泌细胞外基质的特征.

摘要:

目的：探讨以人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）作为软骨组织工程种子细胞，Ⅱ型胶原复合糖胺聚糖支架材料作为细胞载体及其细胞‐支架复合体成软骨的可行性。方法制备Ⅱ型胶原复合糖胺聚糖多孔支架，电镜观察测定支架材料的孔径、孔隙率和亲水性，对支架材料进行相应的组织学分析。培养鉴定 P3代的hUCMSCs ，将hUCMSCs混悬液接种到Ⅱ型胶原复合糖胺聚糖支架上，不加诱导剂进行培养，3周后取出样品行甲苯胺蓝、番红精O染色，Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及扫描电镜观察。结果第3代hUCMSCs高度表达CD29、CD105等间充质细胞标志，几乎不表达CD34等内皮细胞、造血细胞标志。Ⅱ型胶原复合糖胺聚糖支架材料呈白色多孔泡沫状，孔隙率为（91．8±2．17）％，孔径110～230μm ，分布均匀，相互贯通。吸水膨胀率为（213．71±1．31）％，亲水性良好。甲苯胺蓝、番红精O及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性。细胞‐支架复合体在培养过程中可观察到有软骨样组织形成并逐步增多，甲苯胺蓝、番红精O及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均呈阳性，电镜观察显示细胞在支架上增殖活跃，与材料黏附紧密，可见软骨样细胞及其周围大量交错连接的胶原纤维。结论 hUCMSCs与Ⅱ型胶原复合糖胺聚糖支架材料复合，可在体外不经诱导而初步构建组织工程软骨，为软骨损伤的修复奠定了一定的实验基础。

摘要:

目的比较分析离心管构建的组织工程软骨细胞与正常兔关节软骨细胞凋亡调控基因bax和bcl-2 mRNA、蛋白表达的差别及意义.方法取8例离心管构建3周的组织工程软骨做实验标本,以6例3周龄兔关节软骨作正常对照.采用逆转录/聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测bax和bcl-2 mRNA的表达,免疫组化技术检测bax、bcl-2蛋白.结果组织工程软骨和正常关节软骨细胞均表达bax和bcl-2 mRNA;组织工程软骨细胞bax和bcl-2 mRNA的表达量均较正常对照组增高,差异显著(P＜0.05);两组间bax/bcl-2的比值无显著差异(P＞0.05).免疫组化检测到相应的bax与 bcl-2蛋白表达.结论组织工程软骨细胞凋亡同样受到bax与bcl-2基因的共同调节.