摘要:

目的 建立大鼠肋软骨细胞(RCC)分离、培养的方法,探讨其老化过程中细胞外基质及其相关基因的变化,为软骨细胞增殖分化的调控和软骨组织工程修复的研究建立实验基础.方法 显微解剖出大鼠软骨,酶消化法获得分散的单个RCC.观察单层培养的不同代数RCC的细胞形态变化;采用免疫细胞化学方法检测不同代数RCC蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达;RT-PCR从mRNA水平分析Ⅱ型胶原、蛋白聚糖及蛋白聚糖酶-1、2(Aggrecanse-1,2)基因表达量.结果 本实验分离的RCC呈多角形或圆形,第4代细胞形态发生变化;第1代到第3代细胞蛋白聚糖逐渐减少,第4代明显下降;Ⅱ型胶原(Collagen)含量随着细胞的老化逐渐减少;Aggrecanse-1前3代无明显变化,第4代明显上升,而Aggrecanse-2则无明显改变.结论 本研究所建立的分离培养方法可以获得高纯度、高活性的软骨细胞,前3代RCC保持了在体软骨细胞的表型,是研究软骨细胞生物活性的良好材料.

摘要:

细胞老化是正常细胞在受到各种类型的压力刺激后引发的一种程序性反应,表现为永久性细胞周期停滞.细胞老化可能促进生物衰老,并且与肿瘤发生受抑密切相关.至今已知的细胞老化相关信号途径主要有两条,分别是:p53-p21-pRb途径和p16-pRb途径.肿瘤抑制物p53和pRb分别是这两条途径的核心,二者突变在介导细胞老化逃逸、肿瘤发生中起着关键作用.

摘要:

实验观察了D-半乳糖(D-galactose),超氧阴离子自由基和H2O2对培养人胚肺二倍体成纤维细胞(Human fetal lung fibroblast,HBS)的促老化作用.结果表明,D-半乳糖和均使细胞增殖速度减慢,分裂周期中G2-M期细胞比例减少、G0-G1期细胞比例增加、DNA含量下降,此外,细胞中SOD含量降低,丙二醛(Malondildehyde,MDA)水平升高.H2O2上述作用不明显.提示,在D-半乳糖的代谢过程中可能产生了等活性氧自由基,本身和/或其与H2O2进一步反应生成的羟自由基(.OH)过量引起的组织细胞损伤及抗氧化酶活力下降、过氧化产物增多可能是D-半乳糖诱发细胞老化的主要原因.

摘要:

背景：髓核细胞作为椎间盘的主要功能细胞是退变机制研究的重点对象，维持体外培养的髓核细胞的生理功能及细胞表型的稳定至关重要。
　　目的：通过对照研究差速贴壁法在大鼠椎间盘髓核细胞原代培养中的应用优势。
　　方法：取4周龄雄性Wistar大鼠20只，体外分离培养椎间盘髓核细胞，待原代细胞汇合近90%时进行分组传代，差速贴壁组在传代细胞贴壁30 min时，将未贴壁细胞吸出重新调整浓度后传至新的培养皿中，对照组不作处理。差速贴壁组第1、2代细胞均采用该法分离纯化。对两组第3代细胞进行细胞形态学比较及免疫组化鉴定纯度分析、CCK-8检测细胞功能活性并绘制细胞生长曲线。
　　结果与结论：①倒置显微镜观察及苏木精-伊红染色，差速贴壁组细胞均一性较对照组明显增高，对照组髓核细胞中混有较多的成纤维样细胞；②Ⅱ型胶原免疫组化鉴定及纯度分析，2组细胞胞浆均为被染成黄褐色，证实为髓核类软骨细胞；③纯度分析差速贴壁组阳性率显著高于对照组(P<0.05)；④CCK-8细胞生长曲线显示，2组细胞均经过2 d的生长潜伏期，3 d的指数生长期，进入生长停滞期，而对照组较差速贴壁组在潜伏期和指数增长期的早期生长更迅速。⑤结果说明，差速贴壁法是原代培养大鼠髓核细胞一种实用、有效的分离纯化方法；原代培养、经2次差速贴壁法分离纯化的第3代大鼠髓核细胞代谢旺盛、表型一致，细胞纯度更高，其对数增长期可以作为椎间盘细胞机制研究的最佳时期。

摘要:

利用无血清培养基培养角质细胞,研究Mg2+对鼠角质细胞生长和分化的影响.实验结果表明,培养基中Mg2+浓度为5.0 mmol/L时,细胞贴壁率、克隆形成率明显增加,细胞分化比例和老化比例均达到最低.当Mg2+浓度达到10.0 mmol/L时,细胞增殖水平没有显著提高,角质细胞分化比例和老化比例却有一定程度的提高.培养基中加入一定浓度的Mg2+能够刺激角质细胞的增殖,抑制角质细胞的分化,并且延缓细胞的老化.