摘要:

目的:观察小牛血去蛋白提取物注射液(deproteinized extract of calf blood,DECB)对培养的心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用.方法:以培养的心肌细胞为模型,在缺氧再给氧损伤细胞后,观察心肌细胞活力及搏动频率的变化,测定培养液上清乳酸脱氢酶的含量.结果:DECB 0.1及0.3 g·L-1可以提高损伤后心肌细胞的活力,提高心肌细胞的搏动频率,并使培养液上清乳酸脱氢酶的含量明显降低.结论:DECB对缺氧再给氧损伤培养的心肌细胞具有保护作用.

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目的 观察腺苷A1受体激动剂对培养的心肌细胞缺氧再给氧脂质过氧化损伤的影响.方法 以培养的心肌细胞为模型,在缺氧再给氧损伤细胞后,给予腺苷A1受体激动剂R(-)N6-(2-phenylisopropyl)adenosine(R-PIA)(0.1及1μmol/L),测定培养液上清液中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)的含量及细胞MTT代谢率的变化.结果 腺苷A1受体激动剂可以使培养液上清液中LDH和MDA的含量明显降低,SOD的活性增强,细胞MTT代谢率明显升高,且呈现剂量依赖性.而且这种作用可被腺苷A1受体拮抗剂8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine(CPDPX)所拮抗.结论 腺苷A1受体激动剂对缺氧再给氧损伤培养的心肌细胞有保护作用.

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目的 探讨人脐静脉内皮细胞株(ECV304)缺氧再给氧(H/R)损伤的发生机制及三七总皂苷(tPNS)对该病理生理过程的影响.方法 将体外培养的ECV304分为七组,正常组;模型组;tPNS高、中、低浓度组;维拉帕米组;吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)组.对各组进行相应处理后,分别检测各组ECV304超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量、核转录因子-B(NF-κB)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达.结果 模型组,tPNS高,中、低浓度组、维拉帕米组及PDTC组细胞氧自由基清除功能明显低于正常组,NF-κB及ICAM-1表达明显高于正常组,其中tPNS高、中、低浓度组细胞氧自由基清除功能明显高于H/R组,NF-κB及ICAM-1表达率明显低于H/R组,且呈浓度依赖性改变,tPNS高浓度组细胞氧自由基清除功能明显高于维拉帕米组及PDTC组,NF-κB及ICAM-1表达率明显低于维拉帕米组及PDTC组同期.结论 H/R可激活ECV304,使细胞氧自由基清除功能明显降低,NF-κB及ICAM-1的表达明显升高;tPNS能有效改善细胞氧自由基清除功能,降低NF-κB、ICAM-1活性,减轻H/R损伤,且高浓度tPNS效果优于维拉帕米、PDTC.

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目的:观察小牛血去蛋白提取物注射液(deproteinized extract of calf blood,DECB)对培养的心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用.方法:以培养的心肌细胞为模型,在缺氧再给氧损伤细胞后,观察心肌细胞活力及搏动频率的变化,测定培养液上清乳酸脱氢酶的含量.结果:DECB 0.1及0.3 g·L-1可以提高损伤后心肌细胞的活力,提高心肌细胞的搏动频率,并使培养液上清乳酸脱氢酶的含量明显降低.结论:DECB对缺氧再给氧损伤培养的心肌细胞具有保护作用.

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目的 探讨丙泊酚预处理对大鼠离体心肌缺氧再给氧损伤时心肌细胞凋亡及线粒体细胞色素C释放的影响.方法 50只SD大鼠随机分为5组:对照组(C组),DMSO预处理组(D组),25、50、100 μmol·L-1丙泊酚预处理组(P1、P2、P3组).应用Langendorff离体心脏灌注模型,经主动脉用K-H液逆行灌注.各组均缺氧30 min,再给氧60 min.DMSO组、P1、P2、P3组在缺氧前分别以含DMSO、相应浓度丙泊酚的K-H液灌注10 min,再冲洗5 min,重复2次.记录平衡灌注末、缺氧前即刻、再给氧30、60 min时的心功能指标.再给氧60 min时用DNA原位末端缺口标记技术(TUNEL法)测定凋亡细胞,提取心肌线粒体,免疫印迹法测定线粒体和胞质的细胞色素C水平.结果 D组与C组相比差异无显著性;与D组相比,P1、P2、P3组再给氧30 min、60 min时LVEDP降低、LVDP升高(P＜0.05),再给氧末心肌细胞凋亡率降低(P＜0.05或0.01),心肌线粒体细胞色素C释放减少,胞质细胞色素C的量明显降低(P＜0.05或0.01).结论 丙泊酚预处理能够通过抑制心肌线粒体细胞色素C释放到胞质降低心肌细胞凋亡率,减轻心肌缺氧再给氧损伤.

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目的:观察含补阳还五汤的大鼠血清对缺氧24h再给氧4h后新生乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及对一氧化氮(NO)含量的影响.方法:采用Annexin V-PI双标记方法(以流式细胞仪和ELISA法)检测细胞凋亡,以紫外分光光度法测定心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放水平,采用改良Yu方法测定NO浓度,用Ohkawa法测定硫代巴比妥酸(TBARS)反应物质含量.结果:补阳还五汤药物血清能显著抑制心肌细胞的凋亡及LDH释放,降低培养细胞上清液中NO和TBARS水平,其效应呈剂量依赖关系.结论:补阳还五汤具有抗缺氧再给氧心肌细胞凋亡作用,其机制与清除氧自由基和NO特性有关.

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目的探讨内皮细胞缺血再灌注损伤及中药益生注射液对其的拮抗机理.方法用无糖培养基在无氧条件下培养使人脐静脉内皮细胞株ECV304缺氧1.5小时,然后以含糖培养基,在5%CO2和37℃条件下给氧培养5小时,建立内皮细胞缺氧再给氧模型,以模拟体内缺血再灌注对血管内皮细胞的损伤,并用益生注射液干预其缺氧再给氧过程,荧光染色显示胞内钙离子与线粒体,细胞化学染色显示胞内琥珀酸脱氢酶(SDH)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,并检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)浓度.结果缺氧再给氧使ECV304细胞变圆、收缩、脱落,细胞内钙离子含量增高,线粒体膜电位减弱,SDH活性下降,LDH活性增高,培养液中SOD与NO含量减少,而MDA浓度增高;用益生注射液干预后,ECV304细胞形态基本恢复正常,上述多项检测指标的改变得以逆转.结论缺氧再给氧导致ECV304细胞发生脂质过氧化,胞内钙离子超载、SOD活性及NO水平降低、线粒体功能受损,益生注射液可使上述变化得以逆转,从而拮抗内皮细胞缺氧再给氧损伤.

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目的观察含补阳还五汤的药物血清对体外培养大鼠脑皮层神经元生长的影响,为补阳还五汤治疗缺血性脑损伤提供实验依据.方法以体外培养新生SD乳鼠大脑皮层神经元为观察对象,采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞生长情况.观察含药血清对常规培养及在缺氧状态下神经元生长的影响.结果补阳还五汤对常规培养及在缺氧条件下培养的神经元有显著促进生长作用,与空白血清组比较有显著差(P<0.05).结论大鼠以补阳还五汤灌胃给药后,其血清中的药物成份有促进体外培养神经元细胞生长的作用.

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目的:研究人urotensinⅡ(human urotensin Ⅱ,hUⅡ)对大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的作用及机制.方法:将培养的新生大鼠心肌细胞缺氧3h后再给氧3h造成细胞缺氧再给氧损伤(A/R)模型,用台盼蓝染色和MTT染色法分别检测细胞存活率和细胞活性,测定细胞培养上清液中肌酸激酶(CK)和一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮(NO)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)含量,用激光共聚焦显微镜检测细胞内游离Ca2+荧光强度.结果:在1×10-10.5～1×10-9.5 mol/L范围内,hUⅡ明显地抑制A/R损伤引起的大鼠心肌细胞存活率和细胞活性的下降、CK活性和cTnI含量的增高、NOS活性和NO含量的降低及心肌细胞内游离Ca2+含量的增高,但1×10-9、1×10-8.5、1×10-8mol/L hUⅡ却无上述抑制作用.结论:hUⅡ在低浓度时,对大鼠心肌细胞缺氧性损伤有保护作用,其机制可能与促进NO合成和降低细胞内游离Ca2+有关.

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目的:探讨缺血再灌注(缺氧再给氧)对内皮细胞免疫功能的影响及益生注射液的干预效果.方法:用人脐静脉内皮细胞株ECV304缺氧再给氧模型模拟体内缺血再灌注对血管内皮细胞的损伤,并用益生注射液干预其缺氧再给氧过程.间接免疫荧光染色显示胞内核因子-κB(NF-κB),流式细胞术检测细胞表面HLA-ABC、HLA-DR、CD86和CD54,并将内皮细胞与同种异体淋巴细胞混合培养(MELR),检测淋巴细胞增殖程度、IL-2的产生及凋亡淋巴细胞百分率.结果:缺氧再给氧使ECV304细胞变圆、收缩、脱落,胞浆NF-κB表达增高,且由胞浆阳性为主转为胞核阳性为主,细胞表面HLA-ABC、HLA-DR、CD86增高,CD54无显著变化,MELR中3H-TdR掺入量、IL-2生成量显著增多,凋亡淋巴细胞百分率降低.益生注射液干预后ECV304细胞形态基本恢复正常,NF-κB表达未下调,但核阳性细胞百分率降低,以核浆阳性为主,其他多项检测指标的改变得以逆转.结论:缺氧再给氧影响了ECV304细胞几种重要免疫相关分子的表达,益生注射液可发挥拮抗作用,使内皮细胞保持相对正常的免疫学功能.