摘要:

目的 选择适于过继免疫治疗用γδT细胞大量制备的培养基.方法 采用不同培养基(RPMI-1640、AIM-V和OpTmizer,分别添加或者不添加自体血清)对γδT细胞进行培养,比较细胞存活率、纯度、扩增效率和生物学功能.结果 仅未添加血清的RPMI-1640培养基扩增的细胞存活率随培养时间增加略有下降.不论添加血清与否,AIM-V和OpTmizer培养基扩增的细胞纯度都始终高于RPMI-1640.第2周时,未添加血清的OpTmizer培养基扩增的细胞纯度和扩增效率都显著高于RPMI-1640培养基和AIM-V培养基(P均＜0.05).不同培养基扩增细胞表达的CD107a和分泌的肿瘤坏死因子-α差异均没有统计学意义(P均＞0.05),但RPMI-1640培养的细胞对Daudi细胞的杀伤效率显著低于OpT-mizer和AIM-V培养的细胞(P均＜0.05).结论 OpTmizer培养基因其低血清依赖性、高扩增效率和扩增细胞良好的生物学功能,更适用于临床过继免疫治疗用γδT细胞的大量培养.

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目的 探讨中晚期肺癌病人应用细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗的护理规范.方法 回顾性总结2009年9月～2010年10月接受CIK细胞过继免疫治疗139例肺癌病人从护患沟通、心理护理、标本采集、CIK细胞悬液回输和输注后病情观查等环节的经验.结果 139例中晚期肺癌患者接受CIK细胞过继免疫治疗后有1例出现发热,其他患者未出现相关并发症,生活质量均有不同程度改善.结论 实施科学、规范的护理程序是CIK细胞过继免疫治疗实施的前提和保证.

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目的:比较自身免疫细胞联合放疗与单纯放疗后官颈癌患者的细胞免疫功能变化和生存期差异.方法:68例宫颈癌患者,放疗组38例,联合治疗组30例；分离患者外周血单个核细胞( peripheral blood mononuclear cell,PBMC),分别诱导培养CD3AK细胞、CIK细胞(cytokine-induced killer cell)、树突状细胞(dendritic cell,DC)、γδT细胞和NK细胞.流式细胞术检测治疗前后患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD16+ CD56+和γδT细胞的比例和数量及PBMC中穿孔素、颗粒酶B和CD107a阳性表达率.对患者进行5年随访.结果:联合治疗组大多患者生活质量均有改善,联合组卡氏评分高于放疗组(P＜0.05).联合组治疗后患者的免疫细胞绝对值显著高于放疗组(P＜0.05)；PBMC的穿孔素、颗粒酶及CD107a均高于治疗前(P＜0.05),并显著高于放疗组(P＜0.05).联合治疗组中,患者(Ⅰb-Ⅳ期)1、2和5年总生存率分别为93.3％ (28/30)、83.3％ (25/30)和76.6％ (23/30),明显高于放疗组的86.82％( 33/38)、68.4％ (26/38)和57.9％ (22/38) (P ＜0.05)；以Ⅱb和Ⅲ期患者疗效最显著.结论:放疗联合自身免疫细胞治疗官颈癌能提高患者的免疫功能,并延长生存期.

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目的:探讨抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cell, CD3AK)对晚期恶性肿瘤的疗效和患者免疫功能的影响.方法: 选取山东大学附属千佛山医院55例实体瘤患者和12例淋巴瘤患者,分离患者外周血单个核细胞,采用抗CD3Ab、IL-2等诱导自体CD3AK细胞,以CD3AK细胞对患者自体回输.并对患者治疗前后的T细胞亚群和NK细胞(CD16+CD56+)水平进行测定.结果: 晚期恶性肿瘤患者输注自体CD3AK细胞1个疗程后,实体瘤组治疗有效率为25.45%,临床获益率为74.54%;淋巴瘤组有效率为83.33%,临床获益率为91.67%;治疗后两组患者T细胞亚群中CD8+ 下降(P<0.05),CD3+、CD4+细胞及CD4+/CD8+比值及NK细胞计数较治疗前显著升高(P<0.05).结论:自体CD3AK细胞能使晚期恶性肿瘤患者T细胞亚群比例失调和功能低下的状况得到不同程度的改善,有效地控制肿瘤,而且安全性好,无明显不良反应.

摘要:

目的分析DC-CIK细胞治疗晚期恶性肿瘤的临床意义。方法对我院治疗的50例Ⅲ、Ⅳ期恶性肿瘤患者化放疗后1个月行DC-CIK细胞治疗患者资料进行回顾性分析,对接受DC-CIK治疗4周期前后患者的症状、肿瘤负荷及T细胞亚群结果进行随访观察,评价治疗有效率。结果 DC-CIK治疗前后肿瘤客观缓解率(ORR)为23.8%,CD3、CD4、CD8、CD16、CD56均有明显的升高,生活质量评分显著改善,仅少数患者输注过程中出现发热,未见其他不良反应。结论采用DC-CIK细胞治疗晚期恶性肿瘤患者能改善患者免疫功能,改善患者生活治疗,延长生存期,具有一定的临床使用价值。

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[目的]探讨小分子药物(N-乙酰半胱氨酸,NAC)对CD4+中央记忆性T细胞(TCM)体外扩增的影响从而改善过继免疫治疗的效果.[方法]体外分离人类的外周血CD4+T淋巴细胞,将细胞分为两组(实验组和对照组)进行细胞培养,实验组加入N-乙酰半胱氨酸后,通过流式细胞仪和细胞计数仪对两组细胞中的CD4+ TCM的扩增情况进行检测.[结果]在CD4+T细胞体外扩增实验中,10 mmol/L的NAC为促进细胞扩增的最佳浓度；NAC对TCM在CD4+T细胞中的比例无明显的影响;在CD4+T细胞扩增的第15天检测其中TCM的细胞数量,对照组中TCM的数量为(7.24±0.54)×105,实验组中TCM的数量为(5.13±0.47)×106,较之对照组,其TCM的数量有着7倍左右的扩增；对上述两组数据进行统计学分析(t检验),P＜0.01,表明差异具有统计学意义；对上述两组细胞进行凋亡检测,发现实验组中凋亡细胞的比例低于对照组.[结论]NAC可有效地促进CD4+ TCM细胞的扩增,为过继免疫治疗提供简单、安全及有效的体外扩增方法.

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目的:研究脐血来源的细胞毒性T淋巴细胞用于卵巢癌过继免疫治疗的可行性.方法:采用肿瘤细胞和淋巴细胞混合培养法获得脐血来源的细胞毒性T淋巴细胞对人卵巢癌裸鼠移植瘤进行治疗并与外周血来源淋巴因子激活的杀伤细胞相对照.结果:脐血来源的细胞毒性T淋巴细胞有明显的抑瘤作用,移植物抗宿主病的发生不明显.结论:脐血可作为过继免疫治疗中效应细胞来源试用于卵巢癌的治疗.

摘要:

目的:探讨体外细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞对淋巴瘤细胞的杀伤作用.方法:采集健康人外周血单个核细胞(PBMC),经IL-2、CD3Mc-Ab、IL-1、IFN-γ诱导,制备CIK细胞,同时以淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)作为对照,流式细胞仪检测CIK细胞的免疫表型,LDH释放法检测其对淋巴瘤细胞株的杀伤活性.结果:CIK细胞与LAK细胞增殖在前期无明显差异,CIK细胞在培养14d后大量增殖,21d后扩增能力显著高于LAK细胞(P＜0.05);表型分析表明CIK细胞主要由CD3+和CD56+双阳性细胞构成;同一效靶比时,CIK细胞对淋巴瘤细胞株的杀伤活性明显高于LAK细胞(P＜0.05).结论:CIK细胞对淋巴瘤细胞株的杀伤作用强于LAK细胞,具有较强的抗淋巴瘤细胞活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀瘤效应细胞.

摘要:

目的 将全长p链mRNA和肿瘤反应性CDR3移植的δ2链mRNA共转染到抗CD3抗体刺激的PBMC,制备CDR3δ2基冈修饰型γδ T淋巴细胞,研究其抗肿瘤作用.方法 通过PCR扩增含有肿瘤反应性特异CDR3δ2序列(OT3和OT10)的TCR δ2链及γ9链,构建重组质粒pGEM4Z/δ2(OT3)/A64、pGEM4Z/ δ2(OT10)/ A64和pGEM4Z/γ9/ A64;以线性化的重组质粒作为模板,体外合成δ2(OT3)、δ2(OT10)和γ9 mRNA;将δ2(OT3)mRNA和δ2(OT10) mRNA分别与 γ9 mRNA共电转染入抗CD3抗体刺激的正常人PBMC;经流式细胞术检测和分选pδ2(OT3)T细胞和γ%2(T10)T细胞.ELISA及MTT法分别检测上述转染细胞的抗肿瘤作用.结果 CDR3δ2基因修饰的TCRγδ细胞pδ2(OT3)T细胞和γ9δ2 (T10)T细胞能够分泌较高的IFN-γ及TNF-α(P＜0.05),对多种肿瘤细胞具有显著的细胞毒作用(P＜0.05).结论 基因修饰型pδ2 T细胞能够明显增强对肿瘤的杀伤活性,为肿瘤过继免疫细胞的制备提供了新的策略.