摘要:

根据猪Toll样受体7基因(TLR7)序列设计、合成1对引物,直接从三元猪外周血淋巴细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增三元猪TLR7全基因,并进行克隆和测序.测序结果表明,获得了三元猪TLR7全基因序列,其大小为3 160 bp,包含一个完整阅读框(3 153 bp),编码1 051个氨基酸残基,有15个潜在的N-糖基化位点和4个潜在的磷酸化位点,信号肽切割部位位于第29～30位氨基酸之间,跨膜基因序列为第844～866位.TLR7基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高.三元猪TLR7基因的成功克隆为进一步研究猪TLR7基因表达、生物学功能、揭示ssRNA病毒入侵宿主的致病机制以及猪抗病毒免疫及育种的相关研究奠定了基础.

摘要:

本发明公开了一种表达猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因的重组猪伪狂犬病毒毒株，重组猪伪狂犬病毒（Herpesviridae）毒株，CCTCCNO：V201315。本发明将PCV2ORF2基因插入到通用载体PG中，构建了转移质粒PGO。PRVTK-/gG-/gE-病毒接种80-90%融合的单层ST细胞，吸附2h，将质粒PGO转染ST细胞，利用蚀斑纯化技术获得重组病毒PGO株，免疫小鼠。结果显示，商品化PCV2灭活疫苗与重组病毒PGO株免疫组均能诱导鼠产生特异性的体液免疫应答，二者抗体效价明显高于DMEM培养液免疫组且差异显著（p<0.05)。小鼠淋巴细胞增殖实验表明PGO重组病毒免疫组特异性的细胞免疫应答高于PCV2灭活疫苗和DMEM培养液免疫组且差异显著（p<0.05)，并且其能抵抗PCV2强毒的攻击，表明该重组病毒有作为PCV2新型疫苗的潜力。

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本发明公开了一种表达猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因的重组猪伪狂犬病毒毒株，重组猪伪狂犬病毒（Herpesviridae）毒株，CCTCC?NO：V201315。本发明将?PCV2?ORF2基因插入到通用载体PG中，构建了转移质粒PGO。PRV?TK^-/gG^-/gE^-病毒接种80-90%融合的单层ST细胞，吸附2h，将质粒PGO转染ST细胞，利用蚀斑纯化技术获得重组病毒PGO株，免疫小鼠。结果显示，商品化PCV2灭活疫苗与重组病毒PGO株免疫组均能诱导鼠产生特异性的体液免疫应答，二者抗体效价明显高于DMEM培养液免疫组且差异显著（p<0.05)。小鼠淋巴细胞增殖实验表明PGO重组病毒免疫组特异性的细胞免疫应答高于PCV2灭活疫苗和DMEM培养液免疫组且差异显著（p<0.05)，并且其能抵抗PCV2强毒的攻击，表明该重组病毒有作为PCV2新型疫苗的潜力。

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本发明公开了一种鸡传染性喉气管炎双价核酸疫苗，在真核表达载体pIRES的2个多克隆位点中分别插入了ILTV?HN1株gB和ChIL-18完整基因，所述双价核酸疫苗共表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因和鸡IL-18基因。本发明采用的真核双表达载体pIRES在启动子下游的MCS?A和MCS?B的多克隆酶切位点分别插入鸡传染性喉气管炎病毒HN1株gB基因片段和鸡白介素-18基因片段，获得真核双表达质粒pIRES-gB/IL18。避免两种质粒共同免疫时可能存在的细胞摄取不成比例问题，提高局部抗原提成效率，增强局部免疫应答强度，缩短免疫应答潜伏期，为ILTV新型疫苗的研究奠定了基础。

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本发明公开了一种猪α-干扰素复合制剂的制备方法，它的步骤如下：（1）人工合成150bp的短小乳酸杆菌信号肽序列，构建出pUCK-SP载体；（2）构建出pUCK-SP-IFN-α质粒，pUCK-SP-IFN-α质粒经NdeⅠ和EcoRI酶切，回收SP-IFN-α片段；（3）构建干酪乳酸杆菌复制型表达质粒pIAbeta8-plac-SP-IFN-α；（4）通过电转化方法，得到猪α-干扰素复合制剂；本发明拟将猪IFN-α基因导入干酪乳酸杆菌中，从而获得能表达猪IFN-α的干酪乳酸杆菌。这样的菌株集抗病毒、抗菌作用于一身，且可通过口服途径饲喂动物，十分方便。