苜蓿中华根瘤菌042B与公共结瘤基因NODABC有关的大片段物理图谱的构建

• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 苜蓿中华根瘤菌 公共结瘤基因 物理图谱
• 年，卷（期）: 1998,（4）
• 页码范围: 15-22
• 页数: 8页
• 分类号: S435.5|Q78
• 语种: 中文

摘要

将苜蓿中华根瘤菌(SINORHIZOBIUMMELILOTI)042B总DNA提取,用SAU3AI部分酶切后回收20~30KB长的片段,以PLAFR3为载体,构建基因文库.用苜蓿中华根瘤菌NODABC作探针,经SOUTH－ERN杂交获得了三个阳性克隆A、B和C.将这3个阳性克隆所携带的质粒分别命名为PXCA,PXCB,PX－CC.在辅助质粒PRK2013的帮助下,将这3个质粒分别转入NODC－突变株AK1657后接种苜蓿,携带PX－CB质粒的接合子在苜蓿上结瘤.将PXCB用多种酶切后结合SOUTHERN杂交,得到PXCB的物理图谱.将包含NODABC的约2.8KB长的片段克隆到PUC18,得到质粒PXCB1.对PXCB1进行亚克隆得到测序克隆.