Dnmt3b cDNA及其在小鼠胚胎组织中选择剪接异构体的克隆

• 作者: 吴冠芸 尹斌 徐世才 朱宁 朱敏 沈岩 罗一菁 陈雨亭
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: DNA C5胞嘧啶特异的重新甲基转移酶 cDNA克隆 选择剪接
• 年，卷（期）: 1999,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 431-438
• 页数: 8页
• 分类号: Q523+.1
• 语种: 中文

摘要

目的克隆与小鼠胚胎发育相关的新的全长cDNA.方法从小鼠胚胎cDNA文库中筛选出一个新的EST,以8～9 d龄小鼠胚胎组织mRNA为模板进行RACE(rapid amplification of cDNA ends),结合PCR筛选cDNA文库,获得其全长cDNA序列后进行序列同源检索、结构分析和功能预测.根据整合后的cDNA两端序列设计引物进行RT-PCR,克隆PCR产物,并对产物进行全序列测定,验证整合序列的客观性.结果(1)克隆的序列为小鼠DNA C5胞嘧啶特异的重新甲基转移酶(denovo DNA cytosine 5'-specific methyltransferase,Dnmt)基因cDNA,发现该基因比已报道的Dnmt3b cDNA序列在5'方向延伸了152 bp,其起始密码子上游存在一个新的选择剪接区域.(3)从小鼠胚胎组织中克隆出8种Dnmt3b cDNA选择剪接异构体,并均已获得Genbank序列接收号.结论获得了Dnmt3b cDNA的4kb全长序列,发现Dnmt3b基因上游存在新的5'选择剪接序列,可能通过选择剪接形成上游终止密码子的切换;Dnmt3b在小鼠胚胎发育过程中存在着复杂的选择剪接表达.