6种人DNA甲基转移酶3B典型异构体的克隆、表达及对293A细胞增殖的影响

• 作者: 姜树原 孙明英 张柱霞 杨洁 石蕊 邵国 闫少春
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: DNA甲基转移酶3B 异构体 胚肾细胞293A 增殖
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1460-1465
• 页数: 6页
• 分类号: R34
• 字数: 2251字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建6种人DNA甲基转移酶(DNMT)3B典型的异构体的真核表达载体并对其进行过表达,初步探讨其在人胚肾细胞系293A中的生物学作用.方法 以人HCT116 cDNA为模板,采用高保真PCR获得DNMT3B1和DNMT3 B2的全长,并以DNMT3B2为模板,利用特异的引物扩增出DNMT3B3、DNMT3B4、DNMT3B5和DNMT3B7,将PCR产物连接到真核表达载体pCMV-2B上,并对上述载体进行BamH Ⅰ、EcoRⅠ双酶切和测序鉴定,鉴定正确后,将重组质粒转染293A细胞并利用G418筛选出稳定表达的克隆株,MTT法检测细胞增殖活力.结果 双酶切和测序结果表明克隆了6种人DNMT3B异构体CDS序列,经蛋白印迹检测,DNMT3B异构体在293A细胞中获得稳定表达;稳定过表达DNMT3B3、DNMT3B4和DNMT3B7可以抑制细胞增殖.结论 构建了人DNMT3B异构体真核表达载体及获得了其稳定表达细胞株,DNMT3B异构体蛋白对胚肾细胞系293A的增殖有不同的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜树原	包头医学院生物医学研究中心基础医学部	28	37	4.0	4.0
2	闫少春	包头医学院生物医学研究中心基础医学部	25	44	3.0	6.0
3	杨洁	包头医学院生物医学研究中心基础医学部	7	8	2.0	2.0
4	张柱霞	包头医学院生物医学研究中心基础医学部	7	9	2.0	3.0
5	孙明英	包头医学院生物医学研究中心基础医学部	6	5	2.0	2.0
6	石蕊	包头医学院生物医学研究中心基础医学部	1	0	0.0	0.0