过表达DNMT3B7质粒载体的构建及对293A细胞增殖的影响

• 作者: 吉训明 吴松泉 姜树原 孟宪梅 张伟 张姝 张颜波 邵国 黄丽华
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 生物学
• 关键词: DNA甲基转移酶3B 293A细胞 细胞增殖 p21
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1128-1133
• 分类号: Q291
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2013.12.005

摘要

目的 构建DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)的一种异构体3B7的真核质粒表达载体,在体外评价其对人胚肾细胞株293A增殖影响.方法 据GenBank中人DNMT3B7 cDNA序列设计并合成特异性引物,以DNMT3B1为模板,利用高保真Taq酶,进行PCR技术扩增DNMT3B7,并将扩增产物克隆到真核表达载体pCMV-2B中.将携带DNMT3B7基因的质粒pCMV-DNMT3B7及空质粒pCMV-2B转染293A细胞,通过G418筛选出稳定表达的细胞系,MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞的细胞周期分布.同时检测p21蛋白表达情况.结果 成功构建DNMT3B7的真核表达载体并筛选出稳定表达株,与转染空质粒组相比,稳定过表达DNMT3B7组293A细胞株增殖减慢(P＜ 0.0l);过表达DNMT3B7的293A细胞S期细胞比例显著增多(P＜0.05).p21 mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05).结论 DNMT3B7基因过表达可抑制293A细胞增殖,p21可能参与了这一过程的调节.