microRNA-7真核表达载体的构建及其对细胞增殖能力的影响

• 作者: 周军年 岳文 曾泉 袁红丰 裴雪涛 许英晨
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 微小RNAs miR-7 pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP真核表达载体 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 523-527,535
• 分类号: Q754
• 字数: 5128字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.06.007

摘要

目的 构建miR-7 真核表达载体,以研究miR-7过表达后对细胞增殖能力的影响.方法 以人全血标本基因组为模板,PCR扩增miR-7序列,然后将该序列克隆入pHRS-1cla-CMV-EGFP载体中,构建pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体.将构建好的载体瞬时转染入293FT细胞中,利用RT-PCR技术对转染前后293FT细胞中miR-7的表达水平进行检测.将pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体瞬时转染入乳腺癌细胞系MCF-7中,利用CCK-8法以及BrdU增殖实验检测过表达miR-7后细胞增殖能力的变化.结果 构建的pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体质粒酶切和测序鉴定结果正确,实时定量RT-PCR结果表明,与转染pHRS-1cla-CMV-EGFP对照载体细胞相比,转染pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体72 h后的293FT细胞成功地过表达miR-7达76.8倍.CCK-8法以及BrdU增殖实验检测过表达miR-7后乳腺癌细胞系MCF-7的增殖能力显著性下降(P<0.05).结论 成功构建了pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体,瞬时转染后细胞可以有效地高表达miR-7,同时证明过表达miR-7可以使细胞的增殖能力受到明显抑制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	裴雪涛	军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室	124	630	13.0	20.0
2	岳文	军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室	23	90	6.0	8.0
3	袁红丰	军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室	4	10	2.0	3.0
4	曾泉	军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室	5	12	2.0	3.0
5	周军年	军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室	6	13	2.0	3.0
6	许英晨	军事医学科学院野战输血研究所干细胞与再生医学研究室	1	1	1.0	1.0