小鼠B7-H4慢病毒表达载体的构建及对脾细胞增殖的影响

• 作者: 冯俊 敬保迁 李丽 王朝莉 胡为民
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: B7-H4 慢病毒载体 293T细胞
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 200-204
• 分类号: R392.11
• 字数: 4176字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2012.03.003

摘要

目的:构建小鼠B7-H4(rnB7-H4)慢病毒表达载体并观察B7-H4蛋白对脾细胞增殖的影响.方法:从BALB/c小鼠肺脏中克隆B7-H4基因,构建表达载体mB7-H4-EGFP,酶切后克隆入慢病毒表达载体pCDH1-MCS1-EF1-Puro中,命名为pCDH1-mB7-H4-EGFP;以包含起始密码和多克隆位点的寡核苷酸取代mB7-H4作为对照载体pCDH1 -Control-EGFP.分别与包装载体混合物一起经LipofectamineTM 2000转染入293T细胞包装成病毒颗粒,感染293T细胞.pCDH1-mB7-H4-EGFP重组慢病毒感染的293T细胞分别与BALB/c、C57BL/6、BALB/c∶ C57BL/6( 1∶1)小鼠脾细胞混合培养,用MTT法检测其对脾细胞增殖的影响,对照为pCDH1-Control-EGFP重组慢病毒感染的293T细胞进行的相同处理.结果:mB7-H4被成功克隆,测序证实与GenBank的mRNA核酸序列2个核苷酸有差异,但与其编码的氨基酸一致.pCDH1-mB7-H4-EGFP慢病毒表达载体被成功构建.mB7-H4蛋白表达在293T细胞表面,与对照相比,对BALB/c、C57BL/6、BALB/c∶C57BL/6(1∶1)小鼠脾细胞增殖均具有明显抑制作用.结论:成功构建小鼠B7-H4慢病毒表达载体,感染293T细胞后表达出对脾细胞增殖具有抑制活性的mB7-H4膜表面蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	敬保迁	川北医学院免疫学与分子生物学研究所	46	116	5.0	8.0
2	冯俊	川北医学院耳鼻喉科	16	37	4.0	5.0
3	胡为民	川北医学院免疫学与分子生物学研究所	35	80	5.0	6.0
4	李丽	川北医学院病理教研室	32	74	6.0	7.0
5	王朝莉	川北医学院免疫学与分子生物学研究所	28	37	3.0	4.0