慢病毒介导B7-2基因RNA干扰对小鼠树突状细胞诱导T细胞增殖的影响

• 作者: 孔永 沈立军 王婧 王玉玉 邱玉华 颜天铭
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: B7-2 RNAi 慢病毒 树突状细胞 共刺激信号
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 140-145
• 页数: 6页
• 分类号: R392|Q785
• 字数: 4898字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2019.02.003

摘要

目的:制备沉默小鼠B7-2基因的RNAi慢病毒,研究其对体外诱导培养的小鼠树突状细胞B7-2基因表达的干扰效应及对其刺激T细胞增殖的影响.方法:从Gen Bank获取小鼠B7-2基因序列,在其编码区选择3段RNAi靶序列,构建介导B7-2基因RNAi的双发夹RNA慢病毒表达载体,采用DNA测序进行重组载体鉴定.重组慢病毒表达质粒及包装辅助质粒,在脂质体介导下共转染293T细胞制备重组慢病毒并经超高速离心进行浓缩;浓缩慢病毒颗粒感染293T细胞,根据其介导GFP表达的情况测定病毒滴度.分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,采用GM-CSF及IL-4诱导DC的分化,LPS刺激48 h促进其成熟,并进行形态以及表型鉴定.采用制备的小鼠B7-2基因RNAi重组慢病毒感染小鼠骨髓源DC,流式分析其感染效率及对DC表面B7-2分子表达的干扰效率;通过慢病毒感染的DC与小鼠脾脏T细胞混合培养测定慢病毒介导B7-2沉默对DC刺激T细胞增殖能力的影响.结果:小鼠B7-2基因RNAi慢病毒表达载体构建正确;获得了针对3靶点序列RNAi和阴性对照的浓缩小鼠B7-2基因RNAi重组慢病毒,滴度达(2～4)×108TU/ml,重组慢病毒能够有效感染DC及抑制其表面的B7-2分子表达,经小鼠B7-2基因RNAi慢病毒感染及介导B7-2沉默后,DC刺激T细胞增殖的能力显著下降(P＜0.05).结论:慢病毒介导小鼠B7-2基因RNA干扰可沉默DC表面B7-2分子的表达及抑制DC诱导的T细胞增殖效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邱玉华	苏州大学医学部免疫学系	89	426	11.0	15.0
2	王婧	苏州大学实验动物中心	35	53	4.0	5.0
3	王玉玉	苏州大学医学部免疫学系	9	36	3.0	6.0
4	沈立军	苏州大学生物医学研究院	10	15	2.0	3.0
5	颜天铭	苏州大学医学部免疫学系	7	10	2.0	2.0
6	孔永	苏州大学医学部免疫学系	9	9	2.0	2.0