小鼠B7-1基因RNAi慢病毒载体的构建及其沉默效应研究

• 作者: 孔永 朱莹 沈立军 王婧 蔡磊 邱玉华 黄莉
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: B7-1 RNAi 慢病毒 共刺激信号 L929
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1327-1332
• 页数: 6页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3901字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2016.09.018

摘要

目的：构建介导小鼠B7-1基因RNAi的慢病毒载体，研究其对L929细胞表面B7-1分子表达的沉默效应。方法：从小鼠B7-1基因编码区选择3段RNA干扰靶序列，制备转录双发夹RNA的前体DNA，并克隆至慢病毒穿梭质粒，构建B7-1的RNAi慢病毒穿梭载体，测序鉴定。将重组质粒及辅助质粒共转染293T细胞产生慢病毒，经超速离心获得浓缩慢病毒颗粒。通过测定293T细胞GFP表达水平确定病毒滴度，流式细胞术检测感染效率以及对细胞表面B7-1的干扰效率。病毒感染细胞经嘌呤霉素筛选及克隆培养获得小鼠B7-1基因RNAi慢病毒稳定感染的L929细胞，流式细胞术分析细胞中GFP及B7-1分子表达的状况；将感染细胞与分离的小鼠脾脏T细胞混合培养，分析B7-1稳定沉默细胞刺激T细胞增殖的能力。结果：成功了构建小鼠B7-1基因RNA干扰的重组慢病毒载体；获得了滴度达（3～5）×108 TU／ml的浓缩重组慢病毒，重组慢病毒可有效感染L929细胞介导GFP表达以及沉默其表面的B7-1。经筛选获得慢病毒稳定感染的L929细胞，该细胞表面B7-1分子表达受到抑制，刺激T细胞增殖的能力显著下降（P＜0.05）。结论：构建了能够高效感染及沉默小鼠B7-1分子的RNAi慢病毒载体，该载体可稳定沉默L929细胞表面B7-1分子表达，抑制B7-1／CD28信号诱导的T细胞增殖效应。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邱玉华	苏州大学医学部免疫学系	89	426	11.0	15.0
2	黄莉	苏州大学附属儿童医院呼吸科	59	345	11.0	16.0
3	王婧	苏州大学医学部免疫学系	35	53	4.0	5.0
4	沈立军	苏州大学生物医学研究院	10	15	2.0	3.0
5	蔡磊	苏州大学医学部免疫学系	7	8	1.0	2.0
6	朱莹	苏州大学医学部免疫学系	10	5	1.0	2.0
7	孔永	苏州大学医学部免疫学系	9	9	2.0	2.0