小鼠Islet-1基因RNAi慢病毒载体的构建

• 作者: 刘官信 刘建平 智深深 朱静 林建萍 田杰 鲁荣
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒感染 RNA干扰 基因,Islet-1 细胞分化
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 170-173
• 分类号: R349.83
• 语种: 中文

摘要

目的 构建高效沉默小鼠Islet-1基因的慢病毒载体.方法 针对小鼠Islet-1基因设计3个RNAi靶序列,合成相应的短发卡RNA(shRNA) 寡核苷酸序列(oligo):Sh1、Sh2、Sh3,分别插入经酶切后的PLVTHM载体.经PCR和测序方法筛选阳性克隆,抽提阳性克隆质粒经大肠埃希菌扩增后,与其辅助包装质粒共同感染293T细胞制备慢病毒载体,利用斑形成试验测定病毒滴度.感染C3H10T1/2细胞株,以流式细胞仪检测其感染效率、荧光定量PCR检测其干扰效率.结果 与正常C3H10T1/2细胞比较,测序及PCR结果显示目的 片段插入正确;病毒滴度值为3.87×108TU/ml;慢病毒载体对C3H10T1/2细胞感染效率达90.36%; 3个靶点(抑制效率分别为76.8%、55.1%和11.7%)均有干扰效果,与正常细胞比较,Sh1靶点干扰效果最为显著(76.8%,P＜0.05).结论 成功构建高效沉默Islet-1基因慢病毒载体.