JSRV-env慢病毒过表达载体构建及其对NIH3T3细胞增殖的影响

• 作者: 刘淑英 杨惠
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 绵羊肺腺瘤病毒 囊膜基因 慢病毒 细胞增殖 致病机制
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 页码范围: 120-127
• 页数: 8页
• 分类号: Q343.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.11841/j.issn.1007-4333.2020.07.12

摘要

为研究绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)囊膜蛋白(Envelope,env)对NIH3T3细胞(小鼠胚胎成纤维细胞)增殖的影响,构建pCMV-dR8.91-JSRV-env慢病毒过表达载体并感染NIH3T3细胞.将J SR V-env基因连接红色荧光慢病毒报告载体pCMV-dR8.91,基因测序正确后将载体命名为pCMV-dR8.91-JSRV-env.将pCMV-dR8.91-JSRV-env重组质粒和包装辅助质粒共转染HEK 293T细胞包装产生JSRV-env重组慢病毒.将重组慢病毒悬液利用超速离心沉淀法浓缩,real-time PCR测定病毒滴度.浓缩病毒转导NIH3T3细胞72 h后,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况.结果 显示:env同源重组入pCMV-dR8.91载体,测序结果与预期序列一致;pCMV-dR8.91-JSRV-env与包装辅助质粒共转染HEK 293T细胞72 h,real-time PCR验证JSRV-env过表达极显著(P＜0.01),JSRV-env重组慢病毒平均滴度为2.99×108 IU/mL;MTT分析显示10 μg JSR-env慢病毒感染NIH3T3细胞72 h显著促进NIH3T3细胞增殖(P＜0.05).综上,成功构建了JSR V-env慢病毒过表达载体,证实J SR V-env能够促进NIH3T3细胞增殖.