湖羊m6A甲基转移酶METTL14基因CDS序列克隆及表达谱分析

• 作者: 张丹 陈博雯 杨博辉 刘建斌 卢曾奎 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/中国农业科学院羊育种工程技术研究中心
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 湖羊 METTL14基因 m6A甲基化 表达谱分析
• 年，卷（期）: 2024,（10）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 232-240
• 页数: 9页
• 语种: 中文

摘要

【目的】克隆湖羊甲基转移酶样蛋白14基因(METTL14)编码区(CDS)序列，探究其分子特征及组织表达分布规律，为揭示METTL14基因调控湖羊肌肉发育的特异性分子机制打下基础。【方法】提取湖羊肌肉组织RNA并反转录合成cDNA，以cDNA为模板扩增METTL14基因CDS序列，通过ProtParam、ProtScale、SignaIP-6.0等在线软件进行生物信息学分析，并利用实时荧光定量PCR进行湖羊METTL14基因组织表达谱分析。【结果】湖羊METTL14基因CDS序列全长1371 bp，共编码456个氨基酸残基；湖羊METTL14基因CDS序列与黄牛、人类、小鼠、大鼠、猕猴、山羊、弯角剑羚、马、双峰驼、野牦牛、野猪和水牛等12个参考物种的METTL14基因核苷酸序列相似性为89.28%～99.78%，对应的METTL14氨基酸序列相似性为98.66%～100.00%；基于METTL14基因核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树显示，湖羊与山羊的亲缘关系最近，与双峰驼的亲缘关系较远。湖羊METTL14蛋白分子式为C2277H3575N669O709S16，分子量为52179.45 Da，理论等电点(pI)为5.89，不存在信号肽，无跨膜结构域，具有较强的亲水性，属于不稳定蛋白，主要分布在细胞核(占69.6%)；湖羊METTL14蛋白包含12个α-螺旋和10个β-折叠，但以无规则卷曲为主。METTL14基因在湖羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑、睾丸、肌肉及皮下脂肪中均有表达，以心脏中的相对表达量最高，而肝脏中的相对表达量最低。【结论】METTL14作为m6A甲基化的核心蛋白，在物种进化过程中高度保守；METTL14基因在湖羊肌肉和脂肪等多个组织中均有表达，且表达量与机体的代谢活动相关，可作为调控湖羊肌肉生长发育的候选基因进一步研究。