茶树氧甲基转移酶基因的克隆及原核表达

• 作者: 吕海鹏 张悦 彭群华 施江 林智 谭俊峰 郭丽 马成英
• 来源期刊: 茶叶科学
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 氧甲基转移酶 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 页码范围: 532-540
• 页数: 9页
• 分类号: S571.1|Q555
• 字数: 5359字
• 语种: 中文

摘要

获得了一类茶树氧甲基转移酶基因 cDNA 全长并构建了该基因的原核表达载体。以从茶树叶片中提取的总RNA为模板，结合 RT-PCR与RACE克隆技术获得氧甲基转移酶（O-methyltransferase）基因cDNA全长1280 bp，其开放阅读框为1068 bp，编码355个氨基酸，推测的蛋白分子量为39.1 kD，理论等电点为5.68。其氨基酸序列与葡萄和蓖麻氧甲基转移酶基因相似性分别为73%、71%。将该基因片段连接到原核表达载体pET-28a中，转化大肠杆菌 BL21后诱导重组蛋白的表达，经IPTG诱导，SDS-PAGE检测到1条与预测融合蛋白分子量相符的外源蛋白。