两种尿激酶原变体(Ala175→Ser,Tyr187→His,Lys300→His和Ala175→Ser,Tyr187→His)的构建及性质研究

• 作者: 史蔚 唐堂 朱慧 薛宇鸣 马忠
• 来源期刊: 南京大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 尿激酶原 定点突变 内在酶活性
• 年，卷（期）: 2000,（2）
• 所属期刊栏目: 特约述评
• 页码范围: 208-212
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3137字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0469-5097.2000.02.012

摘要

利用定点突变方法,构建了尿激酶原变体基因muk1(Ala175→Set,Tyr187→His,Lys300→His)及muk2(Ala175→Ser,Tyr187→His).两种尿激酶原变体在大肠杆菌BL21中表达得到包涵体,经体外变复性,SP-Sepharose离子交换柱层析,Benzanmidine-Sepharose吸附除去双链尿激酶,得到的蛋白均为银染一条带,用人工合成的发色底物S2444测量muk1、muk2的动力学性质,muk1的内在酶活性比野生型pro-UK降低8倍,muk2的内在酶活性比野生型prm-UK降低2.5倍;它们经纤溶酶(plasmin)激活后的双链活性与pro-UK相比分别为muk1提高50%,muk2和pro-UK相当.在实验基础上讨论了pro-UK高内源性催化活性的机制及其结构基础.