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目的:探讨尿激酶原糖基化对其表达稳定性的影响.方法:构建非糖基化尿激酶原,收取无血清培养上清为检测标本.用嗜热杆菌金属蛋白酶(thermolysin)激活尿激酶原.用抑肽酶(aprotinin)终止激活反应.生色底物S-2444用于显色反应.在405 nm波长处测定分光光度值(OD值)以确定双链成分的比例.在不用thermolysin激活的条件下,用公式计算单链尿激酶原比例.将重组尿激酶原和天然尿激酶原的培养上清置于4℃和37℃.每隔12 h测定总活性和单链成分比例.经过阳离子层析和凝胶层析纯化后,测定蛋白产品浓度、活性.SDS-PAGE电泳鉴定蛋白质分子质量和蛋白含量.结果:在37℃下天然尿激酶原(Asn302位带有糖基化侧链)的活性远高于重组尿激酶原(非糖基化).无论4℃或37℃,糖基化尿激酶原的单链比例均高于非糖基化尿激酶原.纯化后的天然尿激酶原蛋白产品浓度和活性均高于重组尿激酶原.SDS-PAGE提示天然尿激酶原浓度高于重组尿激酶原,分子质量低于重组尿激酶原.结论:较高的温度加速尿激酶原降解.Asn302位的糖基化位点有益于尿激酶原在培养上清中的稳定性.
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关键词热度
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文献信息
篇名 尿激酶原糖基化对其表达稳定性的研究
来源期刊 天津医药 学科
关键词 尿纤溶酶原激活物 糖基化 嗜热菌蛋白酶 抑肽酶 基因表达
年,卷(期) 2007,(3) 所属期刊栏目 实验研究
研究方向 页码范围 211-213,后插3
页数 4页 分类号 R3
字数 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.0253-9896.2007.03.019
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糖基化
嗜热菌蛋白酶
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天津医药
月刊
0253-9896
12-1116/R
大16开
天津市和平区贵州路96号D座《天津医药》编辑部
1959-01-01
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