从噬菌体抗体库中淘选血纤维蛋白特异的单链抗体

• 作者: 孙雷 朱圣庚 高新胜 黄仪秀
• 来源期刊: 中国生物化学与分子生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 噬菌体抗体库 亲和选择 血纤维蛋白特异抗体 DNA改组 抗体成熟
• 年，卷（期）: 2000,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 722-726
• 页数: 5页
• 分类号: Q511
• 字数: 3894字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7626.2000.06.004

摘要

为构建小鼠噬菌体抗体库,以获得对人血纤维蛋白特异的抗体,由小鼠脾脏提取mRNA,经反转录PCR扩增出抗体重链、轻链可变区基因片段,将二者和一段编码十五肽(Gly4er)3的DNA接头借助重组PCR组装成为单链抗体(single-chin antibody,SAb)基因.将单链抗体基因插入噬菌体展示载体pCANTAB-5E,通过电击法转化大肠杆菌TG1细胞,用辅助噬菌体M13K07超感染,构建了库容量在108以上的噬菌体单链抗体库.利用亲和选择方法(淘选),从噬菌体抗体库中选得血纤维蛋白特异的单链抗体.模拟抗体成熟过程,用DNA改组(DNA shuffing)技术使抗体基因重新组合,构建新的改组抗体库,并从中选择到提高了亲和力的噬菌体单链抗体.抗体基因在大肠杆菌中表达,表达蛋白经Sephadex G-75柱层析分离,得到初步纯化的单链抗体蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱圣庚	北京大学生命科学学院	24	234	6.0	14.0
2	孙雷	北京大学生命科学学院	6	35	4.0	5.0
3	黄仪秀	北京大学生命科学学院	9	98	4.0	9.0
4	高新胜	北京大学生命科学学院	2	7	2.0	2.0