小鼠噬菌体抗体库的构建和N-肽结合单链抗体的筛选

• 作者: 朱圣庚 郭振泉 陈玉珍 高新胜 黄仪秀
• 来源期刊: 北京大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 噬菌体展示技术 抗体库 单链抗体 神经肽 亲和淘选
• 年，卷（期）: 2000,（4）
• 页码范围: 489-494
• 分类号: Q511
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0479-8023.2000.04.009

摘要

成功构建一库容量为1.7×108的小鼠噬菌体抗体库,并从中淘选出对N-肽有结合活性的单链抗体.首先从未免疫小鼠的脾脏中提取总RNA,分离出mRNA,经逆转录合成其总cDNA.随后通过PCR分别扩增出抗体重链和轻链可变区VH、VL的基因片断,再经重组PCR将两片断由一编码(Gly4Ser)3十五肽的接头连在一起,并克隆到噬菌质粒pCANTAB 5E中,电击转化大肠杆菌TG1.经辅助噬菌体M13KO7超感染回收全部重组噬菌体,此即噬菌体抗体库.N-肽是一种新发现的神经肽,其N端与阿片肽高度同源,可与阿片肽受体相互作用.对其研究可能有助于了解成瘾机制和有临床应用价值.将生物素化的N-肽与抗体库相互作用,用偶联有链霉亲和素的磁珠富集与N-肽结合的重组噬菌体,经四轮淘选,得到亲和力较高的单链抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱圣庚	北京大学生命科学学院	24	234	6.0	14.0
2	郭振泉	北京大学生命科学学院	30	316	11.0	17.0
3	黄仪秀	北京大学生命科学学院	9	98	4.0	9.0
4	高新胜	北京大学生命科学学院	2	7	2.0	2.0
5	陈玉珍		1	3	1.0	1.0