抗血小板人源噬菌体抗体库的构建和初步筛选

• 作者: 任霞 周虹 王字玲 赵敬湘
• 来源期刊: 临床输血与检验
• 学科: 医学
• 关键词: 血小板 噬菌体展示 抗体库
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 26-30
• 页数: 5页
• 分类号: R331.1+43|R392.11
• 字数: 3414字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-2587.2006.01.009

摘要

目的运用噬菌体抗体库技术构建一个经血小板自身免疫的抗体组合文库.方法从3例慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者的外周血中分离淋巴细胞,提取总RNA,经逆转录合成cDNA,通过半巢式PCR扩增抗体轻链κ链基因和重链Fd段基因,并依次克隆到载体pComb3中构建人源噬菌体Fab抗体库.结果 20次电转后得到库容约为2.3×106 cfu的人源噬菌体Fab抗体库.用多聚甲醛固定的血小板细胞作为抗原,通过3轮亲和选择,ELISA鉴定结合活性较高者,选取3个经测序分析后显示抗体轻链和重链Fd段在核苷酸和氨基酸水平都符合人免疫球蛋白基因结构特征.结论成功构建了抗血小板人源噬菌体抗体库,可用于进一步筛选针对血小板特异性靶点如GPIIb/IIIa等的人源抗体,进行以GPIIb/IIIa受体等作为靶点的治疗性人源抗体的研究和开发.