大容量人源噬菌体抗体库的构建

• 作者: 乔媛媛 刘玉峰 化冰 张国民 王刚 王琰 陈宇萍
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体展示 抗体库 Cre重组 单链抗体
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 463-466
• 页数: 4页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3876字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建大容量易于改造成Diabody的噬菌体单链抗体库,筛选人源性抗体.方法:从正常成人外周血和新生儿脐血中分离淋巴细胞提取RNA,经RT-PCR扩增轻重链可变区基因(VL和VH),通过重叠PCR(over-lap PCR)将VL和VH拼接成单链抗体(ScFv)基因(其中VH两侧是两个非同源的loxp基因),并克隆入噬菌体表达载体PDF,得到初级噬菌体抗体库.将初级抗体库以高MOI超感染Cre+菌株BS1365,通过loxp-cre定位重组系统,介导轻重链在菌内重组配对,然后低感染XL1-Blue菌,得到大容量的次级抗体库.以多种不同抗原对库进行筛选,得到多样性较好的特异性抗体.结果:经超感染重组,得到1.2×1010的大容量抗体库.经三种蛋白抗原筛选,均得到多株特异性较好的噬菌体抗体,并成功构建为活性较好的Diabody.结论:经Loxp-Cre定位重组系统在单细胞内重组,能够高效地构建大容量噬菌体单链抗体库.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘玉峰	第四军医大学西京医院皮肤科	278	1616	19.0	26.0
2	王刚	第四军医大学西京医院皮肤科	228	823	15.0	19.0
3	乔媛媛	海军总医院中心实验科	45	153	7.0	10.0
4	陈宇萍	海军总医院中心实验科	19	67	4.0	7.0
5	王琰	海军总医院中心实验科	59	302	9.0	14.0
6	化冰	海军总医院中心实验科	13	111	6.0	10.0
7	张国民	海军总医院中心实验科	4	13	2.0	3.0