抗内毒素噬菌体抗体库的构建及筛选

• 作者: 俞丽丽 府伟灵 张波 张雪 陈鸣
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体抗体库 内毒素
• 年，卷（期）: 2001,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 138-141
• 页数: 4页
• 分类号: Q782|R392.11
• 字数: 3148字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2001.02.016

摘要

目的： 构建一个鼠源性的抗内毒素单链噬菌体抗体库，从中筛选出对内毒素具有较高亲和力的单链抗体。方法： 从小鼠脾细胞中提取总RNA，通过RT-PCR技术扩增出小鼠抗体重链、轻链可变区基因（VH，VL），用Linker将VH，VL交联形成单链抗体可变区片段（ScFv）。经NotⅠ，SfiⅠ双酶切后与经同样双酶切的pCANTAB5E载体相连，转化入大肠杆菌TG1以构建鼠抗内毒素单链噬菌体抗体库。在援救噬菌体抗体库后，用内毒素淘筛特异性的ScFv，富集的噬菌体阳性克隆重新感染TG1。在96孔板分别援救单个含特异性ScFv的TG1菌落，最后随机挑选出190个菌落经ELISA检测抗内毒素ScFv。 结果： 小鼠血清中抗内毒素的效价为1∶12 800。提取的总RNA浓度为12.381 3 μg/ml，纯度较好。扩增出的VH长约340 bp，VL约320 bp，ScFv约800 bp。转化入TG1后有约1.9×107个菌落。淘筛一轮过后即有3×104阳性菌落长出，190个菌落经ELISA检测有2个阳性克隆。结论： 成功地构建了一个库容量为1.9×107的鼠抗内毒素单链噬菌体抗体库，并从中筛选出了2株抗内毒素ScFv。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	府伟灵	第三军医大学西南医院检验科	406	5132	33.0	56.0
2	张雪	第三军医大学西南医院检验科	58	837	12.0	27.0
3	张波	第三军医大学西南医院检验科	141	1131	17.0	26.0
4	陈鸣	第三军医大学西南医院检验科	122	956	15.0	25.0
5	俞丽丽	重庆市大坪医院妇产科	1	0	0.0	0.0