氧氟沙星噬菌体库的构建、筛选及抗体结构模拟

• 作者: 何扩 张秀媛 杜新军 杨青 王俊平
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 氧氟沙星 单链抗体 噬菌体展示 酶联免疫分析
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研 究 报 告
• 页码范围: 829-834
• 页数: 6页
• 字数: 4150字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1096.2014.30998

摘要

应用噬菌体展示和重组抗体技术制备抗氧氟沙星单链抗体(scFv)库,筛选获得氧氟沙星特异性噬菌体 scFv 以及同源模拟其三维结构。将从氧氟沙星杂交瘤细胞提取的总 RNA,用 RT-PCR 反转录合成 cDNA,以针对鼠源重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因的兼并引物,扩增获得 VH 和 VL 可变区基因,通过SOE-PCR 法将 VH 基因和 VL 基因通过柔性多肽 Linker (Gly4 Ser)3拼接成全长 scFv 基因片段,将双酶切后的scFv 基因片段插入 T7噬菌体,经体外包装后转化宿主菌 BLT5403,成功构建库容量为3×105 pfu/ mL 的抗体库,经4轮吸附-洗脱-扩增的富集,采用直接竞争 ELISA 筛选到4个特异性噬菌体 scFv,运用 Expasy 软件模拟特异性 scFv 的三维结构。为进一步大量表达氧氟沙星单链抗体奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张秀媛		29	100	6.0	9.0
2	何扩		33	96	6.0	8.0
4	王俊平	天津科技大学教育部食品营养与安全重点实验室	31	226	8.0	14.0
7	杜新军	天津科技大学教育部食品营养与安全重点实验室	1	1	1.0	1.0
8	杨青	天津科技大学教育部食品营养与安全重点实验室	2	7	1.0	2.0