鼠抗寻常性天疱疮抗原噬菌体抗体库的构建与筛选

• 作者: 李卫平 潘萌 薛峰 郑捷
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 寻常性天疱疮抗原 噬菌体抗体库 抗寻常性天疱疮抗体
• 年，卷（期）: 2002,（9）
• 所属期刊栏目: 学术会议优秀论文选登
• 页码范围: 661-664
• 页数: 4页
• 分类号: R593.2
• 字数: 3152字
• 语种: 中文

摘要

目的:应用重组噬菌体抗体库技术制备抗寻常性天疱疮抗原(PVA)的单链抗体.方法:用PVA免疫小鼠6 w后,抽取小鼠脾脏细胞RNA,逆转录为cDNA.设计针对小鼠抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的特异性引物,PCR扩增出VH和VL片段.用带有VH3′端、连接肽和VL5′端序列的引物修饰VL得VL′后,与VH进行重叠延伸拼接(splicing by overlap extension,SOE),连接成VH-Linker-VL(ScFv),并大量扩增.此ScFv经限制性内切酶Sfi1和Not1酶切后,以噬粒pCANTAB 5E为载体,构建重组质粒,转导TG1感受态菌,建成库容为1.5×106的噬菌体抗体库,用PVA筛库.结果:构建了抗PVA的特异性单链抗体库,筛选出一高丰度表达单链抗PVA抗体的细胞株.结论:从小鼠噬菌体抗体库中获得特异性的、单克隆的、单链抗PVA噬菌体抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑捷	上海市第二医科大学瑞金医院皮肤科	2	9	2.0	2.0
2	薛峰	上海市第二医科大学瑞金医院皮肤科	4	28	2.0	4.0
3	潘萌	上海市第二医科大学瑞金医院皮肤科	1	7	1.0	1.0
4	李卫平	上海市第二医科大学瑞金医院皮肤科	1	7	1.0	1.0