核定位信号筛选系统的构建

• 作者: 周鹏 孙强 张浩 牛立国 王冀姝 苏成芝 陈萍 韩骅
• 来源期刊: 中国生物化学与分子生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 核定位信号 出核信号 基因克隆 酵母
• 年，卷（期）: 2000,（3）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 301-305
• 页数: 5页
• 分类号: Q51|Q75
• 字数: 3674字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7626.2000.03.003

摘要

建立了一酵母克隆系统用于克隆含核定位信号(NLS)的蛋白质的基因.用表达转录因子GAL4 DNA结合城-p53(GAL4-DBD-p53)融合蛋白的质粒转化酵母HF7c,使GAL4-DBD-p53可结合于报告基因的启动子但因无转录激活域而不能激活转录.构建一酵母穿梭载体,可表达无NLS的GAL4转录激活域-大T抗原(GAL4-AD-LT)融合蛋白.融合蛋白基因的下游插入一多克隆位点.将cDNA文库插入多克隆位点后,如果cDNA片段可编码NLS,则GAL4-AD-LT分子可进入细胞核,并通过LT与p53的相互作用而使GAL4-AD结合于启动子和激活报告基因的转录.构建了这一克隆系统的各质粒,并用绿色荧光蛋白(GFP)验证了其对核内蛋白和胞浆蛋白的甄别能力.这一系统将有助于从cDNA文库中筛选编码带有NLS的蛋白质的基因.