核定位信号分析示踪载体——pGST-EGFP的构建及功能鉴定

• 作者: 何凤田 娄桂予 张艳 李渝萍 柳鹏 王元忠 赵元茵
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 核蛋白 核定位信号 绿色荧光蛋白 谷胱甘肽转硫酶
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 400-404
• 分类号: Q291|Q784
• 字数: 3955字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2011.05.005

摘要

目的 构建谷胱甘肽转硫酶(GST)与EGFP相融合的新型蛋白质示踪载体--pGST-EGFP,以用于蛋白质细胞亚定位信号序列的深入分析.方法 以质粒pEGFP-N1为骨架,融合从pGEX-2TK载体中扩增的GST编码序列,构建成pGST-EGFP融合表达质粒;再插入人工合成的已知核定位蛋白SV40的核定位序列(NLS),构建成pGST-EGFP-SV40 NLS作为阳性对照;另外,构建小分子量蛋白TNNI2在pGST-EGFP的融合表达质粒.将对照pEGFP-N1和各重组质粒分别用脂质体介导,瞬时转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察蛋白的核定位情况.结果 单独表达的EGFP呈全细胞分布,而GST-EGFP融合蛋白只存在于细胞浆;SV40 NLS能将GST-EGFP融合蛋白带进细胞核.虽然TNNI2-EGFP融合蛋白的细胞亚定位呈现核内丰度更高的特点,但TNNI2-GST-EGFP融合蛋白仅限定于胞浆分布,提示TNNI2不能主动定位到细胞核中.结论 成功构建了蛋白质细胞亚定位示踪载体--pGST-EGFP.作为核定位信号分析系统,其对小分子蛋白细胞亚定位的示踪效果优于传统的pEGFP载体,更适用于科研工作中小分子量蛋白质核定位信号序列的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	娄桂予	第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	21	152	7.0	12.0
2	何凤田	第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	127	592	12.0	15.0
3	张艳	第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	63	408	11.0	17.0
4	赵元茵	第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	4	10	2.0	3.0
5	王元忠	第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	8	20	2.0	4.0