EGFP-线粒体蛋白导入载体的构建及功能验证

• 作者: 丁渭 乔录新 张玉林 陈德喜
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 表达载体 绿色荧光蛋白 线粒体导肽
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 992-997
• 页数: 6页
• 分类号: R34
• 字数: 4262字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建能够将外源蛋白导入真核细胞线粒体的真核表达载体,并且通过增强型绿色荧光蛋白的表达进行示踪.方法 利用多重PCR扩增法将线粒体导肽序列与EGFP序列融合在一起,并插入真核表达载体pcDNA3.1,构建成真核表达载体pcDNA5.1-EGFP.将P53基因分别插入pcDNA5.1-EGFP和pcDNA3.1构建成pcDNA5.1-P53和pcDNA3.1-P53载体.经酶切和测序验证后在脂质体介导下分别将上述载体转染293T细胞,一方面在荧光显微镜下比较绿色荧光蛋白与细胞色素C在细胞内的分布情况,另一方面通过免疫荧光法比较P53蛋白在细胞内的定位.结果 绿色荧光的表达分布与细胞色素C具有一致性,且转染pcDNA5.1-P53载体的细胞内P53蛋白集中在胞质线粒体中,而转染pcDNA3.1-P53载体的细胞内P53蛋白主要分布在细胞核内.结论 成功构建能够将外源蛋白导入线粒体的真核表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张玉林	首都医科大学附属北京佑安医院感染科	55	148	7.0	8.0
2	陈德喜	首都医科大学附属北京佑安医院感染科	154	453	11.0	13.0
3	乔录新	首都医科大学附属北京佑安医院感染科	34	74	5.0	7.0
4	丁渭	首都医科大学附属北京佑安医院感染科	12	9	2.0	2.0