人乳头瘤病毒16型结构基因L1在昆虫细胞中的表达及其生物学活性

• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒16型 重组杆状病毒 基因表达 病毒样颗粒
• 年，卷（期）: 2001,（1）
• 页码范围: 30-35
• 页数: 6页
• 分类号: R37|R737
• 字数: 6350字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2001.01.009

摘要

目的 研究与宫颈癌及人类其它多种组织癌症密切相关的人乳头瘤病毒16型(HPV16)的晚期基因L1的表达及其生物学活性。方法 采用PCR法从pBSSK-B/16L1扩增了来自中国妇女鲍温病组织标本的HPV16晚期基因L1，装入杆状病毒转移载体；在DH10Bac内通过转座子Tn7的介导，使携带有杆状病毒多角体蛋白基因启动子Ppolh的HPV16L1基因整合入杆状病毒，形成重组杆状病毒；转染昆虫细胞Sf9进行表达；将感染72?h的Sf9细胞包埋、切片、染色后，电镜观察。提取L1蛋白，免疫BALB/c小鼠。结果 重组杆状病毒在Sf9细胞内高效表达出L1蛋白，经Westernblot发现能与L1抗体特异地结合；薄层扫描显示所表达的L1蛋白占Sf9细胞总蛋白的比例高达31%。经透射电镜观察表明，在细胞核里有大量的重组杆状病毒形成；并且产生了大量的由HPV16L1蛋白单体自组装的病毒样颗粒（virus-likeparticles,VLP）。小鼠免疫实验结果表明，所表达的HPV16L1蛋白具有强免疫原性。结论 此研究为今后L1基因分子流行病学调查、L1蛋白的结构生物学研究、疫苗研制以及HPV相关基础性研究提供了有用的资料。