血小板生成素在毕赤酵母中的表达

• 作者: 吴祖泽 张红卫 林泉 邢振兰 郭树华
• 来源期刊: 山东大学学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 血小板生成素 毕赤酵母 基因重组 诱导表达
• 年，卷（期）: 2001,（1）
• 页码范围: 90-94
• 页数: 5页
• 分类号: Q782
• 字数: 1953字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-9352.2001.01.015

摘要

以人胎肝cDNA文库为模板，用PCR和DNA重组技术，将TPO cDNA克隆到pGEM -T载体并测序，再将目的片段亚克隆到分泌型表达载体上获得重组质粒pPIC9K/TPO，并通过PCR引物设计、扩增和DNA连接使毕赤酵母α-因子的信号肽序列取代TPO固有的信号肽序列，使之与毕赤酵母的α-交配因子(MFα)融合，该表达载体受AOX1强启动子的调控.经电转化和G418筛选获重组酵母KM71/pPIC9K/TPO，并用甲醇进行诱导表达.经甲醇诱导后，酵母重组子可高效分泌表达TPO.经SDS-PAGE和Western Blot分析，显示重组人TPO(rhTPO)分子量约为65 ku，与文献报道的68～85 ku基本一致，表明该蛋白是经过正确加工和糖基化的蛋白.薄层扫描分析显示，重组蛋白占菌体分泌总蛋白的10.14％.由此表明我们用毕赤酵母(pichia pastoris，Pp)表达体系成功地表达了TPO.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张红卫	山东大学生命科学院发育生物学研究所	49	227	9.0	13.0
2	邢振兰	山东大学生命科学院发育生物学研究所	5	7	1.0	2.0
3	郭树华	中国军事医学科学院放射医学研究所	1	7	1.0	1.0
4	林泉	中国军事医学科学院放射医学研究所	1	7	1.0	1.0
5	吴祖泽	中国军事医学科学院放射医学研究所	2	11	2.0	2.0