多拷贝水蛭素基因在毕赤酵母中的分泌型表达

• 作者: 孙蓓 左爱军 曹晓娜 李敬华 梁东春 熊蔚俐 马精彩
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 毕赤酵母 水蛭素 基因 质粒 凝血酶
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 112-114,前插2
• 页数: 4页
• 分类号: R2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2010.02.010

摘要

目的:通过多拷贝克隆技术实现水蛭素(Hirudin)基因在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达.方法:利用基因重组技术,从pPIC9-Hirudin中扩增α-facor-Hirudin插入到载体pA0815中,并构建pA0815-(α-Hirudin)n多拷贝重组质粒,转化毕赤酵母GS115后进行诱导表达,并鉴定表达产物活性.结果:PCR证实成功构建了水蛭素多拷贝毕赤酵母表达载体pA0815-(α-Hirudin)n,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证实能成功高效分泌重组水蛭素,活性测定表明表达的水蛭素有良好的抗凝血活性.结论:成功构建了分泌型水蛭素多拷贝质粒,筛选出多拷贝稳定整合表达菌株,成功表达出具有抗凝血活性的1 600 ATU/mL重组水蛭素,为大规模表达纯化水蛭素蛋白及其临床应用奠定了基础.