更昔洛韦对转染HSV1-TK基因的人肺腺癌细胞A549的体内外杀伤效应

• 作者: 何祥梁 何雪花 李淑萍 郭先健 钱桂生 陈维中 黄桂君
• 来源期刊: 中国药理学报(英文版)
• 学科: 医学
• 关键词: HSV1-TK基因 鸟苷 基因治疗 肺肿瘤
• 年，卷（期）: 2001,（10）
• 所属期刊栏目: 研究原著
• 页码范围: 901-906
• 页数: 6页
• 分类号: R96
• 语种: 英文

摘要

目的：活体内外观察更昔洛韦(ganciclovir，GCV)对转染HSV1-TK基因的人肺腺癌细胞A549杀伤效应.方法：构建一个包含TK基因的逆转录病毒表达载体，用电穿孔法转化人肺腺癌细胞A549，MTT法测转基因细胞对GCV敏感性和观察旁观者效应；流式细胞仪、扫描电镜检测GCV诱导转染细胞凋亡，PCR和原位杂交分别检测转染细胞TK基因整合和表达，活体比较GCV对转染细胞、亲代细胞接种裸鼠皮下肿瘤治疗效果. 结果：转染细胞对GCV IC50比亲代细胞提高46倍，旁观者效应在高细胞密度较低细胞密度明显.FCM发现转染细胞经GCV作用3天后DNA直方图呈现亚G0G1峰，亲代细胞无该峰形成.细胞周期分析表明亚G0G1细胞在A549-TK和A549分别为(12.2±1.7)％和(1.3±0.3)％(P＜0.01).扫描电镜发现转染细胞有明显的凋亡特征如核浓缩、凋亡小体和核呈半月征等，对照细胞无这些变化.PCR、原位杂交表明转染细胞有TK基因整合和表达，体内实验表明转染细胞接种肿瘤受GCV治疗抑制生长，亲代细胞接种肿瘤不受抑制.结论：转TK基因细胞获得GCV的敏感性，旁观者效应杀灭肿瘤细胞与细胞间密切接触有关，TK/GCV杀灭肿瘤与诱导凋亡有关，GCV活体内抑制转TK基因细胞接种肿瘤生长.