长白山白眉蝮蛇毒类凝血酶Gussurobin基因的克隆、表达与纯化

• 作者: JANSON Jan-Christer 安利佳 杨青 胡学军 苏志国 袁晓东 许小明
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 类凝血酶 gussurobin cDNA序列 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: Q5
• 语种: 英文

摘要

根据同源性, 在高度保守的上游信号肽区域设计引物, 通过RT-PCR反应, 从长白山白眉蝮蛇(Gloydius ussurensis)毒腺总RNA中克隆得到类凝血酶gussurobin cDNA, 双向测序得到gussurobin基因的全序列并由此推测出相应的氨基酸序列.与其他已知的类凝血酶不同, gussurobin只含有一个可能的糖基化位点, 即Asn124-Ser125 -Thr 126. 将gussurobin基因克隆到表达载体pPIC9K中, 电极转化至毕氏酵母菌株GS115中, 经G418抗性筛选和营养缺陷型筛选获得重组子. 经摇瓶培养, 获得表达. 经过柱层析分离, 获得SDS-PAGE电泳纯的重组gussurobin.