簇毛麦端体6VS的显微切割及其专化DNA序列的克隆和分析

• 作者: 孔凡晶 张增艳 李连成 林志姗 辛志勇 陈孝 马有志
• 来源期刊: 植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 染色体显微切割及微克隆 簇毛麦 原位杂交 端体异代换系 专化DNA序列 RFLP
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 307-313
• 页数: 7页
• 分类号: Q943
• 字数: 2264字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-9072.2002.03.010

摘要

从簇毛麦(Haynaldia villosa (L.) Schur.)组合CA9211/RW15(6D/6V异代换系)幼胚培养SC2后代中,用原位杂交方法鉴定出T240-6为6VS端体异代换系. 以此为材料,采用微细玻璃针切割法及"单管反应"技术体系,对6VS进行切割分离及LA (Linker adaptor)-PCR扩增.扩增带在100～3 000 bp 之间,大部分集中在600～1 500 bp.利用32P标记的簇毛麦基因组为探针进行Southern杂交,证实扩增产物来源于簇毛麦.扩增产物纯化后,连接到pGEM-T载体上,构建了6VS DNA质粒文库.对文库的分析表明,文库大约有17 000个白色克隆;插入片段分布在100～1 500 bp,平均600 bp.点杂交结果表明,37%克隆有中度到强烈的杂交信号,证明含有中度或高度重复序列;63%克隆有较弱的信号或没有信号,证明为单/低拷贝序列克隆.从文库中获得8个簇毛麦特异克隆,对其中两个克隆pHVMK22和 pHVMK134进行了RFLP分析和序列分析,并利用该探针对小麦抗白粉病基因Pm21进行了检测.RFLP 结果表明,两个克隆一个为低拷贝序列克隆(pHVMK22),另一个为高度重复序列克隆,均为簇毛麦专化DNA序列.以pHVMK22为探针对抗、感病小麦(Triticum aestivum L.)品系的Southern杂交发现抗病品系有一条2 kb的特征带, 该探针可能作为检测抗病基因Pm21的探针.