精子膜抗原提取、纯化及SDS-PAGE分析

• 来源期刊: 引进与咨询
• 学科: 医学
• 关键词: SDS-PAGE分析 精子膜抗原 抗原提取 精子抗原 分光光度计测定 蛋白含量测定
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 页码范围: 60
• 页数: 1页
• 分类号: R446.6
• 语种: 中文

摘要

目的分析正常生育男性精细胞膜抗原 ,以便进一步应用精子抗原于其抗休的检测.方法 :1.精子膜抗原粗制方法 ,按"全国临床检验操作规程"(第二版 ,1998年 ,P398)描述的方法进行 ,即收集 2 0名正常生育男性精子样品 ,用含 0 .5%NP - 40的Tris -Hcl缓冲液抽提. 2 .粗提液蛋白含量测定采用紫外分光光度法. 3.蛋白抗原纯化方法 ,采用冰冷乙醇沉淀法 ,以粗提液 :冰冷 95%乙醇 (- 2 0℃ ) =1:9(v/v)混合 ,并按 1/ 5 0容量加入饱和乙酸钠混匀 ,于 - 2 0℃放置 4 8h.取出后于 - 10℃ ,180 0 g离心 30分钟 ,弃上清 ,倒放试管 ,沥干沉淀 ,- 2 0℃保存备用. 4 .SDS -PAGE分析 ,步骤 3所获样品 ,以NS溶解 ,通过紫外分光光度计测定含量 ,并调节到 6mg/ml.SDS -PAGE分析条件的点样量 2 5 μl,分离胶 17.5%,隔层胶 5%,电泳缓冲液用甘氨酸 -Tris,PH8.6,电压 2 0v过夜 ,次日再 15 0V4h.电泳后凝胶经考麦斯亮兰染色、乙酸 -甲醇洗脱 ,直至显示清晰电泳图谱...