HIV-1 Tat蛋白对人类疱疹病毒8型复制的影响

• 作者: 卢春 曾怡 贾雪梅 黄丽
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: HIV-1 Tat 人类疱疹病毒8型(HHV-8) Rta 可溶性周期复制
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 人与动物病毒
• 页码范围: 306-312
• 页数: 7页
• 分类号: R373
• 字数: 5064字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2003.04.004

摘要

用HindⅢ将HIV-1 Tat101蛋白编码基因从pEV质粒中切出,BamHI、NotⅠ将绿色荧光蛋白(GFP)编码基因从表达质粒pcDNA3.1 + /GFP中切出,分别插入到质粒LZRSpBM N-Z中,构建成重组反转录病毒表达质粒LZRS-Tat101和LZRS- GFP.采用磷酸钙转染法将两重组质粒转染到含反转录病毒env、gal 和pol编码基因的包装细胞Phoenix(ΦNX)中,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系.分别收集稳定细胞系分泌的病毒上清,并感染体外培养的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)BCBL-1细胞.收集LZRS-GFP重组病毒感染的BCBL-1细胞进行流式细胞计数,检测GFP表达水平.收集L ZRS-Tat101重组病毒感染的BCBL-1细胞,提取蛋白作Wes tern blot,检测Tat蛋白表达状况;取细胞总RNA作Nort hern blot和定量PCR,检查HHV-8次要衣壳蛋白ORF26 mRNA转录水平.重组LZRS-Tat101病毒进一步感染HL3T1 细胞(HeLa细胞包含HIV-1-LTR/CAT报告基因),收集感染细胞提取蛋白,检测CAT活性,评价Tat生物学功能.PCR扩增H HV-8复制和转录激活蛋白Rta启动子区上游序列,并克隆至pGL-3 载体中,构建Rta启动子+虫荧光素酶(Luciferase)报告基因重组质粒.此重组质粒进一步电转染预先感染了LZRS-Tat101病毒的BC-3细胞,TPA刺激后收集细胞,检测Luciferase活性 .结果显示:①重组反转录病毒感染BCBL-1细胞,一次感染效率达56 %;②重组LZRS-Tat101病毒能够在其感染的BCBL-1细胞中表达Tat蛋白,且表达蛋白具有转录激活功能;③Tat蛋白不能有效上调 HHV-8 Rta启动子活性;④细胞内HIV-1 Tat蛋白诱导HH V-8可溶性周期复制的能力较弱.提示,单纯HIV-1 Tat蛋白并不能激活潜伏感染的HHV-8.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢春	南京医科大学微生物学与免疫学系	92	236	7.0	9.0
2	贾雪梅	南京医科大学微生物学与免疫学系	29	124	6.0	10.0
3	曾怡	南京医科大学微生物学与免疫学系	27	93	5.0	6.0
4	黄丽	南京医科大学微生物学与免疫学系	16	79	5.0	7.0