酵母双杂交技术筛选克隆丙型肝炎病毒NS3结合蛋白基因

• 作者: 刘妍 张玲霞 成军 李克 洪源 王琳 陆荫英
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 NS3蛋白 酵母双杂交 蛋白-蛋白相互作用
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 31-33
• 页数: 3页
• 分类号: R512.63
• 字数: 2166字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2003.01.012

摘要

为克隆与丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白结合的肝细胞中的蛋白基因,采用酵母双杂交系统Ⅲ技术进行筛选.构建HCVNS3蛋白诱饵酵母质粒,转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选.选择既能在4重营养缺陷培养基(SD/-Trp-Leu-Ade-His)上生长,又能在涂有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养平皿上生长的蓝色菌落,提取此酵母克隆的质粒,转化大肠杆菌后进行测序,并进行生物信息学分析.分析的结果显示,筛选出19个阳性克隆,包括已知功能基因17个,还有1个克隆的测序结果与GenBank中的1个未知功能序列有44%的同源性,初步证明了此基因与HCV NS3有结合活性.说明成功克隆了HCV NS3蛋白结合蛋白基因,为以后研究此基因在HCV致病机制以及在肝细胞中的生理功能提供了线索.