人精子表面蛋白P34H的基因克隆及其在睾丸和附睾中表达的半定量分析

• 作者: 夏欣一 许晓风 高云 黄宇烽
• 来源期刊: 解放军检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 精子表面蛋白 P34H T/A克隆 反转录PCR
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 52-54,44
• 页数: 4页
• 分类号: R69
• 语种: 中文

摘要

目的克隆精子表面蛋白P34H基因的编码区,为进一步体外表达P34H蛋白做准备.方法提取人附睾体部总RNA,并以此为模板,进行反转录PCR获得编码P34H蛋白的基因片段.应用T/A克隆策略,将扩增的P34H基因编码区克隆人T载体,并通过双酶切和DNA测序进行鉴定.同时,以β-actin为内参,进行反转录PCR半定量分析,比较P34H在附睾头部、体部和尾部及睾丸组织中的表达量大小.结果成功地克隆了P34H基因.将P34H的cDNA序列登录GenBank,登录号为AF515625.反转录PCR半定量分析表明P34H主要在附睾体部表达.结论克隆的P34H基因可用于构建表达载体,为进一步表达P34H重组蛋白进行有关P34H的基础和应用研究打下了基础.