斑节对虾UBE2H基因克隆及其表达

• 作者: 傅明骏 刘文生 周发林 唐蕾 江世贵 黄建华
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 斑节对虾 UBE2H基因 克隆 实时荧光定量PCR 原核表达
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 畜牧?兽医?水产?蚕桑
• 页码范围: 1958-1965
• 页数: 8页
• 分类号: S945.47
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/jissn.2095-1191.2016.11.1958

摘要

【目的】克隆斑节对虾（Penaeusmonodon）泛素结合酶E2 H基因（UBE2H），了解其组织特异性表达情况，为揭示UBE2H在斑节对虾卵巢发育过程的作用提供依据。【方法】PCR扩增斑节对虾UBE2H基因的开放阅读框，利用实时荧光定量PCR检测UBE2H基因在斑节对虾各组织及不同发育期斑节对虾肝胰腺和卵巢中的表达情况；并构建pET32a-UBE2H原核表达重组质粒，进行诱导表达及蛋白纯化。【结果】克隆获得的斑节对虾UBE2H基因全长1010 bp （GenBank登录号KU870456），其中，5'非编码区77 bp，3'非编码区378 bp，开放阅读框555 bp（编码184个氨基酸）。斑节对虾UBE2H蛋白等电点（pI）4.88，分子量20.85 kD。斑节对虾UBE2H氨基酸序列与其他物种相似度很高，为78.00%~83.00%。实时荧光定量PCR检测结果显示，UBE2H基因在斑节对虾淋巴组织中表达量最高，其次为鳃；在斑节对虾不同卵巢发育期肝胰腺和卵巢中的表达量均呈先上升后下降的变化趋势，但其峰值出现时间存在差异，肝胰腺的最高表达量出现在卵巢III期，卵巢的最高表达量出现在卵巢II期。经原核表达获得的斑节对虾UBE2H融合蛋白约39.00 kD，纯化后的蛋白浓度为2.92μg/μL。【结论】斑节对虾UBE2H参与了其卵母细胞发育和肝胰腺中卵黄蛋白的转运过程，与斑节对虾的卵巢发育密切相关。