人肝细胞生长因子重组腺病毒的构建及其对人胎肝细胞细胞周期的影响

• 作者: 张兴荣 张忠兵 张新 林勇 程志红 谢渭芬 陈伟忠 陈岳祥
• 来源期刊: 中华消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人肝细胞生长因子 复制缺陷型重组腺病毒 基因治疗 肝细胞移植
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 336-339
• 页数: 4页
• 分类号: R57
• 字数: 3350字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0254-1432.2003.06.004

摘要

目的利用AdEasy系统构建人肝细胞生长因子(HGF)复制缺陷型重组腺病毒(AdHGF),并观察其对人胎肝细胞细胞周期的影响.方法将质粒pUCHGF扩增、酶切获得人HGF cDNA片段,插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack巨细胞病毒(CMV)启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-HGF,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAdHGF,经293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒AdHGF;将AdHGF体外感染人胎肝细胞,以RT-PCR检测HGF在胎肝细胞的表达;同时通过流式细胞仪测定AdHGF对胎肝细胞细胞周期的作用.结果连接、重组后通过酶切和测序法筛选出pAdHGF;经293细胞包装,3 d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,氯化铯梯度离心纯化最终获得约4×1010efu/ml滴度的重组病毒;AdHGF体外感染人胎肝细胞3d后,HGF表达明显增加,流式细胞仪检测结果显示感染后的胎肝细胞由G0/G1期向S期和G2/M期转化.结论利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和HGF的重组腺病毒Ad-HGF;AdHGF体外感染胎肝细胞可显著提高HGF的表达并促进肝细胞增殖,这将为肝细胞移植和基因治疗肝纤维化提供新的手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张新		11	190	5.0	11.0
2	程志红		3	99	2.0	3.0