Rb基因增强HSV-TK/GCV系统"旁观者效应"的机制研究

• 作者: 丘钜世 乔慧 向锦 朱全胜 李扬 郑树森
• 来源期刊: 中华骨科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因,视网膜母细胞瘤 基因疗法 转染 质粒 骨肉瘤
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 骨肿瘤
• 页码范围: 47-53
• 页数: 7页
• 分类号: R73
• 字数: 4719字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0253-2352.2003.01.011

摘要

目的探讨Rb和HSV-TK基因共转染增强HSV-TK/GCV系统"旁观者效应"的可能性及其机制.方法构建含长度为1.65kg Rb基因的真核表达质粒pcDNA3.1-Rb,用DOTAP将pcDNA3.1-Rb以及携带HSV-TK基因的质粒tgCMV/HyTK分别或共同导入骨肉瘤细胞株OS732.应用RT-PCR和Northern blot检测TK和Rb基因的表达;用细胞计数、流式细胞仪分析和软琼脂克隆形成实验观察细胞的生长状况;用半定量RT-PCR法、Western Blot和罗氏黄荧光传输法检测裂隙连接蛋白基因Connexin 43的表达和细胞间裂隙连接信息通讯的能力;用MTT法和混合共培养实验分别检测各种细胞对GCV的敏感性和HSV-TK/GCV系统的"旁观者效应".结果成功地构建了真核表达质粒pcDNA3.1-Rb;得到三种转基因的细胞株OS732TK、OS732Rb、OS732RbTK;并在mRNA水平检测到OS732TK和OS732RbTK细胞内HSV-TK基因的表达,在OS732Rb和OS732RbTK细胞内存在内源性和外源性Rb基因的表达;与OS732相比,OS732Rb和OS732RbTK细胞的形态发生改变,其生长速度减慢,软琼脂形成集落能力降低,细胞周期阻滞于G0G1期;OS732Rb细胞的Connex-in 43表达和细胞间信息通讯能力增强;仅TK阳性细胞OS732TK和OS732RbTK的存活率与GCV的浓度存在剂量依赖性关系,但在与TK阴性细胞混合共培养实验中,OS732和OS732Rb细胞均显示对GCV的敏感性,在相同处理条件下,OS732Rb细胞的存活率明显低于OS732细胞.结论Rb基因通过抑制骨肉瘤细胞的生长和提高细胞间信息通讯能力来增强HSV-TK/GCV系统的"旁观者效应".