利用DNA家族重排提高青霉素G酰化酶合成活力

• 作者: 周政 张爱晖 李仁宝 杨晟 王晶茹 袁中一 陈茂林
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 青霉素酰化酶 DNA家族重排 合成水解比
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 573-579
• 页数: 7页
• 分类号: Q5
• 语种: 英文

摘要

DNA家族重排技术是酶定向进化的有力工具, 已在实际应用中获得了巨大成功. 来源于Providencia rettgeri、Escherichia coli和Kluyvera citrophila的青霉素酰化酶基因序列同源性为62.5%～96.9%. 在Providencia rettgeri青霉素酰化酶基因克隆和表达的基础上, 利用DNA家族重排技术构建了上述基因的嵌合体突变库. 通过平板初筛获得有活力的阳性克隆, 表达提取突变酶测定其合成水解活力比. 对突变酶进行随机测序的结果表明多基因嵌合体突变库显示出明显的多样性. 通过一轮重排及筛选, 获得了合成活力提高40%的突变酶, 并且发现α亚基的重排对酶合成活力的提高更加有效. 上述方法的应用有望获得合成活力进一步提高的青霉素G酰化酶.