巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的定点突变及其动力学性质研究

• 作者: 周丽萍 周政 袁中一
• 来源期刊: 工业微生物
• 学科: 生物学
• 关键词: 巨大芽孢杆菌 青霉素G酰化酶 定点突变
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 9-13
• 页数: 5页
• 分类号: Q55
• 字数: 2908字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2003.01.003

摘要

为了提高青霉素G酰化酶(PGA)在酸性及有机溶剂中的稳定性,以大肠杆菌的晶体结构为模板,用软件PMODELING同源模建巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的三维结构并且选择PGA分子表面的合适碱性氨基酸突变为丙氨酸.通过三种不同的快速PCR介导定点突变的方法,将位于PGA的α亚基21位、128位和β亚基492位、512位的赖氨酸残基分别突变为丙氨酸,获得四个突变酶Kα021A、Kα128A、Kβ492A和Kβ512A.其中Kα128A和Kβ512A保持与野生型相近的酶活力,其动力学性质如最适温度、最适pH、Km及Kcat没有明显变化;突变酶Kα021A和Kβ492A则丧失了酶活力.上述结果表明,PGA分子表面非活性中心的赖氨酸→丙氨酸点突变使突变子的性状发生了分化,突变效应呈现出丰富的多样性.该有理设计不但可以提高酶的稳定性,而且为揭示PGA结构和功能的关系提供了一个新的研究模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周丽萍	江苏大学医学技术学院	33	163	7.0	10.0
2	袁中一	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所	38	695	13.0	26.0
3	周政	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所	8	21	2.0	4.0