提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体的表达和抗体的功能鉴定

• 作者: 俞莉章 吕英谦 周丽君 张春丽 王琰 白银 艾军魁
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 膀胱肿瘤 嵌合抗体 真核表达载体 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 333-337
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 4114字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0376-2491.2003.04.021

摘要

目的探讨人-鼠嵌合抗体ch-BD1体内和体外的表达和功能. 方法用分子生物学方法得到系列弱化表达的双氢叶酸还原酶(DHFR)基因片段,将其克隆入载体pDHL-BD1中构建得系列弱化表达DHFR基因的人-鼠嵌合抗体pWSD1-BD1, pWSD2-BD1, 和pWSD3-BD1.将这些嵌合抗体以及pDHL-BD1分别转染缺陷表达DHFR基因的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)/DHFR-细胞,以Northern印迹鉴定其DHFR基因表达水平.将不同浓度的氨甲蝶呤(MTX)加入转染细胞的培养液,测定上清中的抗体水平.用99m标记纯化的ch-BD1,加入系列稀释的人膀胱癌EJ细胞溶液中,测定结合在细胞上的抗体放射活性,计算标记抗体的亲和常数.将人膀胱癌EJ细胞注射入3只Balb/C小鼠后肢根部,4周后对肿瘤进行放射免疫显像.将标记抗体注射入小鼠尾静脉,分别于2 h, 6 h, 22 h 和24 h后进行放射显像. 结果构建载体的DHFR基因表达活性由强至弱的顺序为pDHL-BD1>pWS1-BD1>pWS3-BD1>pWS2-BD1.MTX浓度为10-6 mol/L时ch-BD1的表达水平与DHFR基因的基础表达水平明显相关,DHFR基础水平越高抗体的表达水平亦越高.EJ细胞与标记抗体孵育后,ch-BD1的免疫活性分数为76%,亲和常数为3.56×109 M-1; 鼠单抗BD1的免疫活性分数为81%,亲和常数为1.22×109 M-1.99m标记的ch-BD1经尾静脉注射入小鼠体内后6 h主要分布于肿瘤部位,22 h后特异地分布于肿瘤部位,24 h后仍浓聚于此. 结论 DHFR基因基础表达水平的降低有效地增加MTX对外源基因的扩增作用.抗人膀胱癌人-鼠嵌合的表达具有理想的体内外对人膀胱癌的亲和活性,具有一定的临床应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王琰	解放军海军总医院中心实验室	15	176	9.0	13.0
2	周丽君	解放军海军总医院中心实验室	5	13	2.0	3.0