一种插入116个氨基酸的亮氨酰-tRNA合成酶具有高酶活力

• 作者: 凌晨 李彤 王恩多 童耕雷 黄颖
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 大肠杆菌 亮氨酰-tRNA合成酶 插入变种 表达和纯化 活力
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 225-229
• 页数: 5页
• 分类号: Q5
• 语种: 英文

摘要

大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶(LeuRS)是第1类氨基酰-tRNA合成酶, 由860个氨基酸残基组成, 催化亮氨酸tRNA的亮氨酰化.研究发现, 在它的CP1结构域内368和369间的肽键间插入253～368的肽段, 该插入变种的酶仍具有酶活力, 取名为LeuRS-C.由于这一插入变种的不稳定性, 构建了His6-LeuRS-C的表达质粒, 用Ni-NTA柱亲和层析的方法进行纯化.发现His6-LeuRS-C虽然插入了116个氨基酸残基, 但仍具有全部的天然LeuRS的活力.测定了His6-LeuRS-C的酶学动力学常数, 比较了它与天然LeuRS的从CD光谱得到的二级结构和热稳定性.