杂合启动子HREAF的构建及其肝癌特异性分析

• 作者: 张金强 徐元基 杜芝燕 陆应麟 陈惠华 陈泽建
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 肝癌 缺氧应答元件 甲胎蛋白核心启动子 溶瘤腺病毒 基因克隆
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 474-479
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4918字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2003.06.002

摘要

本研究将在几乎所有肝癌细胞中均有高特异性的杂合启动子HREAF用于构建肝癌特异性溶瘤腺病毒.根据文献报道的缺氧应答元件(HRE)和人甲胎蛋白(AFP)核心启动子(AF0.3)基因序列,设计并合成2对引物,采用PCR方法从肝癌细胞基因组DNA中扩增获得大小分别约为560 bp的HRE DNA片段和310 bp的AF0.3 DNA片段,连接到pGEM-T Easy载体进行测序,证明获得了HRE和AF0.3的基因片段.将HRE和AF0.3的PCR产物分别进行PstI和SspI酶切并末端补平后直接连接,将此约700 bp的连接产物克隆到pGEM-T Easy载体进行测序,证明杂合启动子HREAF构建成功.将HREAF亚克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle并在其后克隆入受其调控的腺病毒早期基因E1,构建成肝癌特异性溶瘤腺病毒穿梭载体pShuttle-HREAF-E1,经PCR及酶切鉴定.将pShuttle-HREAF-E1转染肺癌细胞株及AFP产量不等的不同人肝癌细胞株,经E1a的RT-pCR检测证实杂合启动子HREAF可调控目的基因在AFP产量不等的不同人肝癌细胞系中特异性高表达.杂合启动子HREAF及腺病毒穿梭载体pShuttle-HREAF-E1的构建为进一步研制肝癌特异性重组溶瘤腺病毒及其体内外肝癌特异杀伤作用的研究打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜芝燕	军事医学科学院基础医学研究所	39	184	8.0	12.0
2	陈惠华	军事医学科学院基础医学研究所	18	66	3.0	7.0
3	陆应麟	军事医学科学院基础医学研究所	50	330	9.0	16.0
4	徐元基	军事医学科学院基础医学研究所	31	150	7.0	11.0
5	张金强	军事医学科学院基础医学研究所	5	10	2.0	3.0
6	陈泽建	军事医学科学院基础医学研究所	4	6	2.0	2.0